液相色谱仪是一种用于分离、鉴定和定量复杂混合物中各组分的精密分析仪器，广泛应用于化学、生物、医药、环境、食品等领域。其使用方法涉及多个步骤，需要严格遵守操作规程以确保结果的准确性和仪器的寿命。以下是液相色谱仪的使用方法：
　　一、使用前准备
　　1.检查仪器状态：
　　确认仪器电源连接正常，各部件（泵、自动进样器、柱温箱、检测器等）处于关闭状态。
　　检查废液瓶是否已清空，溶剂瓶是否清洁。
　　2.准备流动相：
　　根据分析方法选择合适的溶剂（如水、甲醇、乙腈等），并进行脱气处理（使用超声波脱气机或在线脱气机），防止气泡影响泵的稳定性和基线噪声。
　　将脱气后的流动相倒入干净的溶剂瓶中，并插入相应的吸液管。
　　3.准备色谱柱：
　　确认所用色谱柱的类型（如C18反相柱）、规格（长度、内径、粒径）是否符合方法要求。
　　检查色谱柱两端密封是否完好，安装时注意流向（通常有箭头指示）。
　　新柱或长期未用的柱需按说明书进行活化和平衡。
　　4.准备样品：
　　样品需溶解在合适的溶剂中，必要时进行过滤（使用0.22或0.45μm滤膜）和离心，以去除颗粒物，防止堵塞系统或污染色谱柱。
　　二、开机与系统平衡
　　1.开启设备：
　　打开HPLC各组件电源（通常顺序：溶剂瓶→泵→柱温箱→检测器→电脑）。
　　启动色谱工作站软件（如ChemStation、Empower等），建立或打开方法文件。
　　2.设置流速与流动相比例：
　　在软件中设置初始流速（如1.0 mL/min）和流动相A/B的比例（如80%水:20%甲醇）。
　　确保泵的排液阀（Purge Valve）处于“打开”状态。
　　3.排气与冲洗：
　　启动泵，以较高流速（如3-5 mL/min）冲洗管路5-10分钟，排出系统内的气泡。
　　关闭排液阀，将流速调至正常分析流速。
　　4.平衡色谱柱：
　　以分析方法的初始流动相比例冲洗色谱柱，直至检测器基线稳定（通常需20-30分钟）。基线平稳、无明显漂移是系统平衡的标志。
　　三、进样分析
　　1.设置分析方法：
　　在软件中设定完整的分析方法，包括：
　　流速程序
　　梯度洗脱程序（如需要）
　　柱温（如30°C）
　　检测波长（如254 nm）
　　进样体积（如10μL）
　　运行时间
　　2.进样：
　　将样品瓶放入自动进样器的样品盘中，或使用手动进样器。
　　在软件中创建序列（Sequence），输入样品名称、进样体积、运行次数等。
　　启动序列，仪器将自动完成进样、分离、检测和数据采集。
　　3.监控运行过程：
　　观察压力、基线、峰形是否正常。异常压力升高可能提示堵塞；基线漂移或噪音大可能提示流动相或检测器问题。
　　四、分析结束与关机
　　1.冲洗系统：
　　分析结束后，用与色谱柱兼容的溶剂（如反相柱常用甲醇或乙腈）冲洗系统20-30分钟，去除残留的缓冲盐或强保留物质。
　　若使用了缓冲盐，需先用水冲洗，再用有机相保存。
　　2.保存色谱柱：
　　将色谱柱从系统中卸下，两端用堵头密封，按要求保存（如C18柱保存在甲醇或乙腈中）。
　　3.关机：
　　关闭检测器灯源（如氘灯）。
　　依次关闭泵、柱温箱、自动进样器。
　　关闭电脑和仪器总电源。
　　4.清理：
　　清空废液瓶，清洗样品瓶和进样针。
　　五、数据处理与报告
　　1.在色谱工作站中打开采集的数据文件。
　　2.进行积分、校准、定量计算（外标法、内标法等）。
　　3.生成分析报告，包括保留时间、峰面积、浓度、纯度等信息。
　　总结：液相色谱仪的使用是一个系统过程，强调规范操作和日常维护。正确使用不仅能获得准确可靠的分析结果，还能显著延长仪器和色谱柱的使用寿命。初学者应在有经验人员指导下操作。