储存条件：

2-8℃保存。

有效期：

一年。

注意事项：

● 本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。

● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。

● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。

● 使用性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。

● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。

产品简介：

线粒体(mitochondria)是真核细胞中产生能量的重要细胞器。细胞中的能源物质—脂肪、糖、部分氨基酸在此进行最终的氧化，并通过偶联磷酸化生成ATP，供给细胞生理活动之需。

对线粒体结构与功能的研究通常是在离体的线粒体上进行的，本试剂盒用简便快速的方法即可在1 小时内提取得到线粒体蛋白。

试剂盒以外自备试剂和仪器

● 移液器、吸头 ● 离心机及离心管

● 涡旋振荡器 ● 冰箱，冰盒

使用方法：

使用注意事项：

. 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

. 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

1、 取洗净擦干后并去除叶梗和粗脉的1g 植物组织样本剪碎①，采用以下一种方法处理：

I． 加入3ml 提取液后用匀浆机/Dounce 匀浆器匀浆。

II． 置于研钵中用液氮研磨，研磨后加入3ml 冷的提取液 。

III． 加入3ml 提取液直接置冰上研磨。

2、 将匀浆用250 目细胞筛或3 层纱布或脱脂棉过滤。或者在4℃，100×g 力条件下离心1 分钟，收集上清，弃沉淀。

3、 将滤液700g 离心10 分钟，取上清。

4、 将上清11000g 离心20 分钟。

5、 弃上清，留沉淀。

6、 每200ul 蛋白提取液B 中加入1ul 蛋白酶抑制剂混合物混匀。用200-400ul 蛋白提取液B 重悬沉淀，在4℃条件下振荡20 分钟，至无明显沉淀。

7、 在4℃，14000g 条件下离心15 分钟。

8、 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到线粒体蛋白。

9、 将上述蛋白提取物定量②后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验③。

注：

① 培养细胞直接收集细胞后用Dounce 匀浆器匀浆即可，匀浆后直接进行第3 步离心。

② 建议用BCA 法进行蛋白定量。

③ 蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。