技术资料
S1核酸酶说明书
发布时间:2017/5/10 10:12:00本产品从Aspergillus oryzae中纯化得到,是单链特异性的核酸内切酶,能将DNA或RNA降解成为酸可溶性5′-P核苷酸,也可以降解双链核酸中的单链部分。本产品可以除去DNA-DNA和DNA-RNA杂交体中的单链部分、可以将双链DNA末端平滑化和进行S1 mapping。本产品在0.4M NaCl,0.6% SDS和0.8M尿素中活性稳定,当反应液中含有40~50%甲醛时需将酶量增加10倍。本产品对热极其稳定,在底物存在下65~70℃仍能表现活性。
本产品的特点如下:
1. 分子量为32000,且依赖 Zn2+的糖蛋白质。
2. 最适合的pH为4.5(CH3COONa 缓冲液)。
3. 必要的辅因子为Zn2+。
4. 抑制剂为EDTA溶液(1~20 mM)和磷酸盐。抑制剂磷酸盐分别是磷酸(2mM抑制活性50%)、焦磷酸盐(20μM抑制活性50%)、dAMP(85μM抑制活性50%)和dATP(1μM抑制活性50%)。
低温运输,-20℃保存,有效期一年。
使用方法:
DNA单链部分的特异性分解
1. 将底物DNA与S1核酸酶以及S1核酸酶缓冲液混合,反应体系如下:
DNA 1μg
10×S1核酸酶缓冲液 2μL
S1核酸酶(5U/μL) 2μL
超纯水 up to 20μL
2.将反应混合液置于23℃反应15分钟。
3. 向反应液中加入 2uL自备的0.5 M EDTA溶液,终止反应。
4. 用自备的Klenow Fragment或T4 DNA Polymerase把反应液中的DNA片段修复成平滑末端(使用方法请参考上述产品的使用手册)。