Myc标签序列及常见问题解析
发布时间:2023/9/19 16:29:00Myc标签是来源于c-myc基因产物的多肽蛋白标签,可以通过重组DNA技术融合到蛋白的C端或N端。它可以促进标签蛋白的亲和纯化以及标签蛋白的分离和检测。
Myc标签的多肽序列是:EQKLISEEDL(或写作-Glu-Gln-Lys-Leu-Ile-Ser-Glu-Glu-Asp-Leu-)。Myc标签包含10个氨基酸,Myc标签(EQKLISEEDL标签)多肽的分子量是1202 Da。
Myc标签实验中常见的问题解析:
1、流穿中有目的蛋白
①填料过载
推荐解决方案:减少上样体积或增加填料体积。
②结合时间太短
推荐解决方案:延长样品和填料的结合时间,可过夜孵育。
③标签未暴露
推荐解决方案:可以加入低浓度的变性剂,上样前透析。
④溶液中试剂不兼容
推荐解决方案:样品上样前进行透析。
2、洗脱组分中没有目的蛋白
①目的蛋白不稳定
推荐解决方案:使用新鲜样品、低温操作、细胞裂解液中加入蛋白酶抑制剂。
②目的蛋白表达量太低
推荐解决方案:优化蛋白表达量、增加上样量,减少缓冲液中NaCl浓度。
③样品中无标签融合蛋白
推荐解决方案:纯化前Western检测是否有c-myc标签蛋白
3、背景太高
①非特异性吸附
推荐解决方案:最后一次洗杂后,填料转到新的管子里再洗脱或IP。
②洗杂不充分
推荐解决方案:增加洗杂次数,每次清洗孵育5-10min、增加洗杂液中盐离子浓度。
4、纯化后,如何裂解Myc标签?
在某些应用场景希望可以去除Myc标签,例如用于蛋白的结晶。为了允许Myc标签裂解,需要在标签和蛋白之间设计一个蛋白酶裂解位点。在Myc标签后面的EK裂解位点(Myc-EK位点-蛋白结构)可以使Myc标签和裂解位点完全去除,在 Myc标签的特异裂解后不留下任何额外的氨基酸。关于EK和HRV-3C蛋白酶的裂解位点和标签去除的更多信息。
Myc标签(EQKLISEEDL 标签)已广泛应用于重组蛋白的表达和生产。Myc标签允许使用连接在琼脂糖珠上的Myc标签特异性抗体对被标记的蛋白进行简单而有效的亲和纯化。Myc标签(EQKLISEEDL 标签)也可通过使用Myc标签特异性抗体用于western blot检测。可以添加Myc标签到蛋白的C端或N端,用于在几乎所有的表达系统中表达。
义翘神州已成功生产许多Myc标签蛋白,并通过Myc标签亲和色谱法进行纯化。义翘神州在根据蛋白结构设计Myc标签方面具有丰富的经验,并可处理蛋白纯化过程中出现的任何问题。义翘神州还开发了高灵敏度的Myc标签(EQKLISEEDL 标签)特异性抗体,用于western blot、ELISA、免疫荧光和免疫沉淀检测。义翘神州也开发了自己的Myc标签(EQKLISEEDL 标签)亲和纯化树脂。