离子交换层析法是蛋白纯化的一种方式，通过带电的溶质分子与离子交换层析介质中可交换离子进行交换，从而达到分离纯化的目的。离子交换层析法主要依据电荷间的相互作用，利用带电分子中电荷的微小差异而进行分离，具有较高的分离容量。几乎所有的生物大分子都是极性的，都可使其带电，所以离子交换层析法的应用很广泛。下面为大家介绍在离子交换层析实验中遇到的七大问题，有对应的原因及解决方案：

问题一：在盐梯度中蛋白质不能洗脱

可能的原因：

缓冲液的pH不对

盐浓度太低

解决方案：

使用pH更靠近蛋白质pI的缓冲液

使用更浓的洗脱缓冲液

问题二、蛋白质出现在清洗相中

可能的原因：

①结合缓冲液的盐浓度太高

②样品的盐浓度太高或pH错误

③柱子没平衡好

④离子变性剂或其他添加剂

⑤结合到柱子上

解决方案：

降低结合缓冲液的盐浓度

更换样品的缓冲液

重复或延长平衡时间直到电导恒定

清洗柱子

问题三：分辨率比预想的要低

可能的原因：

①梯度斜率太抖

②流速太高

③蛋白质或脂质沉淀到柱子上

④样品上样前没有恰当过滤

⑤蛋白形成聚合体

⑥凝胶紧密结合

⑦柱子安装不好

⑧检测仪的流动池或柱中或柱后的混合体积太大

解决方案：

使用更平缓的梯度或增加一个平台

较低的流速下分离

清洗和再生柱子

再生柱子、过滤样品、重复层析

使用脲素或变性剂清洗柱子

运行有色的化合物观察条带检测装柱效果，如有必要重装柱子

更换流动池或减小柱后体积

问题四：层析图中峰形前拖尾或太圆

可能的原因：

①柱子超载

②柱子没装好

③柱子需要再生

解决方案：

降低样品的上样量，重复试验

运行有色的化合物观察条带检测装柱效果，如有必要重装柱子

清洗再生柱子，如果这样还不行，换一个新的

问题五：层析图汇总峰形拖尾

可能的原因：

①样品太黏

②柱子的滤器上或凝胶床的顶部

③发生了蛋白沉淀

④柱子装的不好

解决方案：

减低蛋白质的量，从样品中出去核酸

清洗柱子，更换或清洗滤器

问题六：获得的蛋白质量正常但活性低

可能的原因：

①靶蛋白在洗脱缓冲液中不稳定，因而失活了

②酶与辅酶或对其活性是必需的因子分离

③柱子上有微生物生长

解决方案：

变换洗脱条件

收集所有的组分进行测定并重复试验

清洗柱子并且在20%乙醇中或其他抑菌剂中保存凝胶

问题七：洗脱级分中蛋白质的量比预想的少得多

可能的原因：

①蛋白质被蛋白酶降解

②在样品的准备中蛋白质吸附到过滤器上

③柱子上有微生物生长

解决方案：

在缓冲液中加蛋白酶抑制剂

使用其他型号的滤器并在缓冲液中加变性剂

清洗柱子并且在20%乙醇中或其他抑菌剂中保存凝胶