免疫沉淀（IP）综述

一、原理及概述

免疫沉淀（Immunoprecipitation，IP）是利用固定在磁珠或琼脂糖树脂等固相支持物上的特异性抗体对抗原进行小型亲和纯化的方法。需要从细胞或组织裂解物中分离用于免疫印迹检测或其他检测技术的蛋白和其他生物分子时，免疫沉淀是最常用的方法之一。

免疫沉淀（IP）是利用抗原抗体特异性反应，从特定混合物中（通常是细胞裂解液或表达上清）中纯化富集目的蛋白的一种方法。传统的IP实验是抗体与目的蛋白结合后，再与蛋白Protein A /G(结合抗体Fc片段)偶联的琼脂糖或磁珠孵育，通过离心得到珠子-蛋白A/G-抗体-目的蛋白复合物，复合物经过洗涤、洗脱后用于后续下游实验。IP是许多蛋白质相关研究的重要步骤，用于研究蛋白质的存在、相对丰度、蛋白表达的上下调、蛋白至稳定性及相互作用等。

二、用于免疫沉淀的磁珠和琼脂糖树脂

由于IP技术是作为柱式亲和色谱层析的改进方法而开发的，其最初在微量离心管中使用少量（10–25 μL）琼脂糖树脂完成。琼脂糖是不同形状和大小（直径50-150 μm）的海绵样结构。必须通过离心从样品和缓冲液中分离树脂：可以沉淀透明树脂并小心移除溶液，或者使用微量离心过滤管保留树脂并收集离心后管中的溶液。这些限制了琼脂糖IP的可扩展化或自动化程度。

磁性微粒（如Bio-Linkedin磁珠）已经大幅取代琼脂糖，成为免疫沉淀和其他微量亲和纯化方法的shou选支持物。磁性微粒是球形固体，抗体结合仅限于每个磁珠的表面。虽然磁珠不具有多孔中心以增加结合能力的优势，但它们明显小于琼脂糖微珠（直径0.2-4 μm），可提供足够大的总表面积以满足高容量的抗体结合。

强力磁力架可将磁珠定位到孵育管的侧壁，使其不阻碍细胞裂解物抽吸，避免吸出与磁珠结合的免疫复合物。磁性分离无需离心，从而不会产生离心导致的抗体-抗原结合破坏和目标蛋白损失。这使得从磁珠中手动移液更简单，并且可使用仪器全自动完成磁珠操作程序——甚至可用于96孔微孔板。

三、免疫沉淀的类型

最简单的免疫沉淀可用于分离单个蛋白（抗体的靶抗原）以研究其特性、结果、表达、活化或修饰状态。IP也用于研究初级抗体/蛋白与其他蛋白或核酸的相互作用。

免疫共沉淀（Co-IP）

免疫共沉淀是研究蛋白质相互作用的常见技术，基本原理与IP相同。利用抗体共沉淀裂解物中与抗原结合的抗体或相关蛋白复合物。

染色质免疫沉淀（ChIP）

染色质免疫沉淀分析可用于鉴定基因组中与DNA结合蛋白（如转录因子和组蛋白）结合的区域。将蛋白质与DNA暂时交联固定并剪切DNA，目标蛋白与核酸序列一起被沉淀后进行DNA鉴定。

RNA免疫沉淀（RIP）

原理与ChIP相似，利用RNA结合蛋白被沉淀后，用RT-PCR或cDNA测序对沉淀进行RNA鉴定。

标签免疫沉淀

上述免疫沉淀方法中均依赖特异性识别靶蛋白的抗体，需要抗体很少或不能与胞内其他靶标发生交叉反应，存在局限性。但利用表位标记蛋白，就可以使目的蛋白更易识别特定抗体并与之结合产生沉淀。

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