如何制备多克隆抗体？

多克隆抗体是如何产生的？首先通过将特异性抗原注射至实验动物（如兔和山羊等）体内，刺激宿主产生一定的免疫应答。然后对动物进行重复免疫，以获得高滴度的抗原特异性抗体。数周之内，便可以从抗血清中收集和纯化多克隆抗体。

相比于单克隆抗体的制备，多克隆抗体的制备更为简单高效，成本也更为低廉。另外，多克隆抗血清可在较短时间内完成制备（4~8周），而单抗制备则需要花费3~6个月。

义翘神州提供多克隆抗体制备服务，最快仅需45天交付抗血清或纯化抗体。您只需提供抗原的基因序列，我们就可以为您制备高亲和力的多克隆抗体，以满足您在研究或诊断方面的应用。

兔多克隆抗体的制备流程：

利用兔子制备多克隆抗体涉及4个关键步骤，具体概述如下。

步骤1：抗原制备

蛋白抗原或多肽抗原合成是多抗制备的第一步。目标抗原的纯度对于抗体来说很关键，直接影响最终多克隆抗体的质量。抗原中的杂质（＜1%）也可能具有免疫原性（例如许多细菌抗原），可能导致抗体识别杂质，而不是目标抗原。

义翘神州拥有重组蛋白表达平台，在CHO、HEK293和大肠杆菌中有着丰富的重组蛋白表达经验，可提供专业高效的抗原制备服务。

步骤2：动物免疫

多克隆抗体制备时，如何选择动物取决于这3个方面：所需抗血清的数量、抗原物种与免疫动物之间的亲缘关系以及免疫原制备的经验。兔子通常是多抗制备的首选，体积大，每次可抽取多达25mL的血清，对兔子本身无显著的不良影响。

免疫佐剂是多抗制备时用于增强机体免疫应答的辅助物质。弗氏佐剂是一种最常用的免疫佐剂，分为完全弗氏佐剂和不完全弗氏佐剂。在佐剂存在的情况下，将蛋白抗原通过肌肉注射、皮内注射或皮下注射的方式注入选定种类的动物体内。初次免疫的4~8周后，开始进行加强免疫，并每隔2~3周进行1次。初次免疫和每次加强免疫之后，都需要进行动物采血并测定抗体效价。当抗体效价达到预期水平时，即可放血制备抗血清。

步骤3：抗体纯化

对于多克隆抗体的制备，亲和纯化是一种高效的纯化方法。

蛋白A/G亲和纯化可从抗血清富集免疫球蛋白G（IgG），并且除去大量不需要的蛋白。但产品仍然有大量非特异性IgG的存在，可能导致在各种ELISA、免疫组织化学和蛋白质免疫印迹等免疫检测中背景偏高。

为了从抗血清中分离出特异性多克隆抗体，通常使用抗原特异性亲和纯化。抗原亲和纯化可除去大量非特异性IgG组分，并且富集与目标抗原发生特异性反应的免疫球蛋白组分。

步骤4：质量控制

纯化后，抗体需要经过一系列QC检测，以确保多克隆抗体的质量。抗体浓度测定是在280nm（A280）测定其OD值。使用SDS-PAGE电泳用于检测多抗的纯度。ELISA法可用于测定多克隆抗体的效价。根据下游检测需求，可对抗体进行标记，用于IHC、WB、ELISA等实验。

目前义翘神州提供多克隆抗体制备服务，包括：快速鼠单克隆抗体制备服务、快速兔多克隆抗体制备服务、Beacon?单克隆抗体制备服务，更多服务详情可以关注：https://cn.sinobiological.com/services/fast-antibody-service