在生物医学领域中，假病毒中和检测已成为一种重要的技术手段，用于研究病毒感染、免疫应答以及药物筛选等多个方面。本文将详细介绍假病毒中和检测的定义、方法及实际应用，帮助读者更好地理解这一技术的内涵与价值。

什么是中和抗体？

中和抗体是一类与病毒结合并使病毒失去传染性的抗体。当病毒侵入人体时，浆细胞会产生病毒特异性抗体，但只有少数是中和抗体。

中和机制如下：

(1)改变病毒表面的构象；

(2)与吸附相关的病毒表位结合，阻断其与宿主细胞受体的相互作用；

(3)与病毒形成免疫复合物，易于被巨噬细胞清除；

(4)当病毒表面抗原与中和抗体结合时会激活补体，从而导致病毒裂解。

S蛋白（spike protein）是SARS-CoV-2病毒的主要包膜蛋白，由S1和S2亚基组成的三聚体跨膜糖蛋白，负责识别宿主细胞受体即血管紧张素转换酶2(ACE2)并介导膜融合。S1亚基上的受体结合域(RBD)直接参与宿主受体识别并介导病毒入侵。S蛋白上的受体结合结构域(RBD)，被认为是病毒感染宿主细胞的关键位点和大多数中和抗体的靶标。中和抗体可阻止S1或RBD与ACE2结合，从而防止病毒侵入宿主细胞并最终阻止病毒感染(图1)。因此，S1或RBD的突变可能会导致SARS-CoV-2有较强的传染性。

我们为什么要检测中和抗体？

中和抗体的检测是疫苗开发和临床评估的重要指标之一。好的疫苗应该能够产生高效的中和抗体。中和抗体水平随时间推移而降低，通过持续监测中和抗体水平可以判断疫苗保护效力持续多久。此外，针对SARS-CoV-2变异株，疫苗能否产生有效的中和抗体是值得怀疑的。因此，SARS-CoV-2中和抗体检测对于评估群体免疫和监测疫苗保护效力是至关重要的。

如何检测中和抗体？中和抗体检测方法：

中和抗体检测试验包括病毒中和试验、假病毒中和试验和替代病毒中和试验。

①病毒中和试验

中和抗体检测的金标准是病毒中和试验，主要包括空斑减少中和试验和微量中和试验。两种方法都使用定量的活病毒与不同稀释度的等量血清混合，并接种预先准备好的单层细胞。最后，根据空斑形成单位或细胞病变效应来评估中和抗体的效价。由于涉及到活病毒的操作，这些检测只能在生物安全三级实验室进行，极大地限制了空斑减少中和试验和微量中和试验的使用。

②假病毒中和试验

目前，越来越多的实验室使用假病毒中和试验进行中和抗体检测。SARS-CoV-2假病毒以非致病性病毒(如复制缺陷型HIV-1)为载体，将载体病毒的包膜蛋白替换为SARS-CoV-2的S蛋白，并引入检测信号分子，例如GFP和荧光素酶。假病毒利用S蛋白的RBD结构域与ACE2结合，模拟病毒入侵的过程。中和抗体可有效抑制SARS-CoV-2假病毒感染宿主细胞(图2)，并通过信号检测评估中和抗体效价。由于假病毒为一次性感染病毒，不具备自我复制能力，无生物安全危险，所以这种方法可以在生物安全二级实验室进行。

③替代病毒中和试验

替代病毒中和试验是基于竞争性酶联免疫吸附试验(ELISA)的原理，利用重组RBD蛋白与重组ACE2蛋白的结合作用来模拟病毒-细胞相互作用。样品中的中和抗体可有效阻断RBD蛋白与ACE2蛋白的结合。与病毒和假病毒中和试验相比，替代病毒中和试验更安全、更容易执行且耗时更少。

义翘神州新开发了一系列优质RBD蛋白，涵盖野生型(货号: 40592-V08B)、Alpha变异株(货号: 40592-V08H82）、Beta变异株(货号: 40592-V08H85)、Gamma变异株(货号: 40592-V08H86)，Delta变异株(货号：40592-V08H90)，Omicron变异株(货号：40592-V08H121)。在替代病毒中和试验中，这些RBD蛋白可用于检测不同中和抗体对不同变异株的中和活性(表 1)。结果表明，义翘神州开发的这些抗体具有不同的中和活性。

同时义翘神州提供假病毒中和检测服务，详情可以关注义翘神州网。