双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法，操作步骤如下：
　　1） 将特异性抗体与固相载体联结，形成固相抗体。洗涤除去未结合的抗体及杂质。
　　2） 加受检标本，保温反应。标本中的抗原与固相抗体结合，形成固相抗原抗体复合物。　　洗涤除去其他未结合物质。
　　3） 加酶标抗体，保温反应。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合　　的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。
　　4） 加底物显色。固相上的酶催化底物成为有色产物。通过比色，测知标本中抗原的量。　　在临床检验中，此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原，例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。只要获得针对受检抗原的异性抗体，就可用于包被固相载体和制备酶结合物而建立此法。如抗体的来源为抗血清，包被和酶标用的抗体分别取自不同种属的动物。如应用单克隆抗体，一般选择两个针对抗原上不同决定簇的单抗，分别用于包被固相载体和制备酶结合物。这种双位点夹心法具有很高的特异性，而且可以将受检标本和酶标抗体一起保温反应，作一步检测。