阿尔玛蓝细胞增殖与细胞毒检测试剂说明书

发布时间:2017/5/9 13:05:00

阿尔玛蓝(Alamar Blue)也称刃天青(Resazurin)、天兰化钠,树脂天青,是一种安全,无毒的蓝色染料。加入培养液中,可作为氧分子电子传递链的受体,呈现由蓝向红转变的颜色变化,反映所研究的细胞或微生物对氧分子的消耗,因而常被用作氧化还原指示剂,以显示被观察细胞和细菌的代谢活动。阿尔玛蓝的颜色改变可用光度计测定。阿尔玛蓝的粉红色细胞代谢产物也可用荧光检测,其激发光波长在530-560 nm之间,发射光波长为590 nm。

检测实验可以在微孔板中进行,如果用酶标仪检测结果,不仅检测操作更加简便,快速,而且可以对细胞和细菌的数量进行定量分析以及药物高通量筛选(High Throughput Screening, HTS),因此阿尔玛蓝法是一种简便、快捷、敏感、高效、安全而又经济的检测方法,可广泛地用于细胞增殖代谢,药物的细胞毒作用的体外测定以及病原微生物的快速检测与鉴定。

与台盼兰、TTC、MTT、MTS等分析法相比,本产品具有下列特点:

1. 阿尔玛蓝法操作简便,溶液稳定。

2. 阿尔玛蓝法采用单一试剂,可以连续、快速地检测细胞的增生状态。

3. 阿尔玛蓝对细胞无毒、无害,不影响细胞的抗体合成与分泌等活性,可以对同一批细胞的增生状态进行连续观察和进一步的实验观察,同时几乎不干扰细胞正常代谢。

低温运输,-20℃避光保存,有效期一年。

使用方法:

1. 细胞的增殖和细胞毒性实验,一般可在96 孔细胞培养板中进行。

2. 每孔加入100μL 细胞悬液。细胞的数量取决于实验目的和培养时间。增殖实验每孔通常加入103 个以上数量的细胞;细胞毒性实验每孔至少加入5×103 个或以上数量的细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等因素确定)。

3. 接种的细胞按照实验需要,送入细胞培养箱进行培养。增殖实验通常要给予0-10μL 特定的药物或生长因子进行刺激。细胞毒实验通常要给予0-10μL 抑制因子或细胞毒药物。

4. 培养结束后,取出本产品,置室温融化混匀,于洁净工作台内按10μL/孔加入微孔板中,在细胞培养箱内继续孵育12-24 小时,培养液颜色由蓝变为粉红(如采用荧光分光光度法,只需孵育5-8 小时)。

5. 在570nm 测定吸光度,参考波长600nm。如无此滤光片,可用565 nm和610 nm 的滤光片替代。

6. 也可用荧光分光光度法检测,激发光波长在530-560 nm 之间,发射光波长为590 nm。检测时间可在结果以荧光强度表示。