通用型全基因组扩增试剂盒说明书

发布时间:2017/5/9 13:13:00

本产品是用于基因组DNA扩增全基因组的试剂盒,可以方便、简单、快速、经济的得到稳定产量的基因组DNA扩增样品。本产品有如下优点:

1. 基于phi29 DNA聚合酶的高保真性、高合成率和超强链取代能力。

2. 可以扩增基因组达上万倍,具有高产量和高保真性的特点。

3. 可使用各种来源的样品,包括全血,干血,发根,口腔粘膜刮液培养细胞,真菌和病毒等。

4. 操作简便快捷,恒温(30℃)反应,无须PCR仪即可实现扩增。

5. 产物可用于多种后续试验,包括多重PCR、长片断PCR、定量PCR、克隆、文库构建、单倍型分析、测序、基因芯片分析、各种遗传分析(片段差异,微卫星差异,SNP,STR)等。

低温运输、-20℃保存, 有效期一年

本产品适用于纯化好的基因组DNA。

1. 在PCR塑料管中加入1 uL纯化好的基因组DNA,用量在100pg-100ng之间。可以同时做一个不加DNA模板的阴性对照。

2. 在PCR管中依次加入2.5 uL WGA溶液A,1 uL WGA溶液B,超纯水4.3uL,轻柔吹打混合均匀(现在PCR管中总体积为8.8 uL)。

3. 95℃保温3-5分钟,室温短暂离心半分钟,然后冰上放置15分钟。

4. 然后依次向上述反应液中加入0.5 uL dNTP,0.2 uL BSA,0.5 uL Phi 29 DNA聚合酶(10 U/uL),轻柔吹打混合均匀。

5. 30℃保温3-12小时。使用PCR仪进行30℃保温并打开热盖保温。如果采用30℃水浴,在样品管中加入30-50 uL石蜡油以防水分蒸发,因为30℃长时间的水浴也能使水分蒸发到管壁,从而改变反应体系中各成分的浓度、降低WGA反应效率。如果模板DNA量比较高,WGA三小时即可检测到DNA扩增。

6. 65℃保温10分钟使phi29 DNA聚合酶灭活。注:由于phi29 DNA聚合酶有DNA外切活性,所以将其灭活以免干扰后续反应。

7. 立即取3 uL WGA反应液进行电泳检测扩增效果。注意:WGA缓冲液中不含有甘油和电泳染料,所以需要先加上样缓冲液8. 扩增的DNA可以用于后续试验或冰箱长期保存。