胰蛋白酶,质谱级说明书

发布时间:2017/5/11 21:54:00

胰蛋白酶(Trypsin)是丝氨酸蛋白酶,可特异性地切开赖氨酸和精氨酸残基的羧基端。胰蛋白酶这种严格的特异性是蛋白质鉴定的基础。天然胰蛋白酶易于自我水解,产生假胰蛋白酶,后者特异性较广,含有胰凝乳蛋白酶样活性。存在于胰蛋白酶制剂中的这些自我水解产物能产生多余的肽片段,从而干扰质谱检测到的片段的数据分析。

本产品是质谱分析级胰蛋白酶,其能提供限度的灵敏度。胰蛋白酶中的赖氨酸残基已经过还原甲基化修饰,成为活性高且稳定的分子,抗拒自我水解的性能特别强。纯化的胰蛋白酶的特异性又由于TPCK 处理使胰凝乳蛋白酶失活而进一步提高。处理过的胰蛋白酶经过亲和层析纯化,制成冻干粉。本产品具有下列特点:

1. 纯度高,使用TPCK 处理过,并经亲和纯化得到。

2. 产品质量稳定,每批都经过质谱检测。

3. 方便使用,以小瓶提供。

4. 价值高,保证5 次冻融循环后,性能稳定,这样使残余试剂量。

5. 本产品能够用于胶内消化、溶液中酶解和质谱分析等实验。


低温运输,-20℃保存,有效期一年。干粉溶解在50mM 醋酸中后,-20℃保存。

若要长期储存,将溶解的胰蛋白酶存于-70℃。将冻融循环限制在5 次以内。


溶液中酶解实验举例

1. 将目的蛋白溶解在6M guanidine HCl (or 6–8M urea or 0.1% SDS),50mM Tris-HCl (pH 8),2–5mM DTT (or β-mercaptoethanol)的溶液中。

2. 95℃加热15–20分钟或者60℃加热45–60分钟,自然冷却。

3. 分析变性蛋白质时,加入50mM NH4HCO3 (pH 7.8) or 50mM Tris-HCl,1mM CaCl2 (pH 7.6),使guanidine HCl or urea终浓度至少为1M。如果上步已经加入SDS,可以不加入NH4HCO3。分析非变性蛋白质时,将蛋白样品溶解在pH为7-9的缓冲液内即可。

4. 加入胰蛋白酶,使胰蛋白酶:蛋白质=1:100 -1:20 (w/w)。37℃孵育至少1小时。将反应体系移至-20℃或者加入胰蛋白酶抑制剂TCA(终浓度10%)终止酶反应。也可以将反应溶液的pH降到4.0以下,终止酶反应。

5. 反相HPLC或者SDS-PAGE分析酶解反应结果。