本试剂盒是基于SP6 RNA聚合酶的RNA体外转录试剂盒，它利用含有SP6启动子的模版DNA，以NTP为底物，从SP6启动子下游开始合成与模版DNA中一条链互补的RNA，简单快速获得大量的RNA分子。本产品具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需提供含SP6启动子的DNA模板即可以进行体外转录实验，不需要单独准备每一个成份。

2. 单溶液预配液，减少加样次数，避免了操作误差，增加了可重复性。

3. 模版DNA可以是线性化的质粒DNA，也可以是PCR扩增产物。

4. 可以合成的RNA的长度在20nt到2000 nt之间。

5. 产品配方经过精心优化，每ug DNA模版可以合成2-6 ug RNA。

得到的RNA可以用于RNA 结构研究、核酶生物化学、体外翻译、RNA-蛋白质相互作用、反义技术、SELEX 技术和 RNA 干扰（RNAi）等实验。

低温运输，-20℃保存, 有效期一年。

使用方法：

一、制备DNA模板

PCR片段和质粒DNA都可以用作体外转录的模板，但是必须注意以下几点。一是必须使用线性化的DNA。如果是质粒DNA，则必须先用适当的限制性内切酶切成线状。二是需要转录的DNA序列的上游必须有SP6启动子。如果模板是PCR产物，则可以在设计引物时将SP6启动子序列（5’ATT TAG GTG ACA CTA TAG AGN G 3’）加上，转录其实是从3端G AGN G中的个G开始。如果是将DNA片段克隆到载体上，则需要选择有SP6启动子的载体，并且克隆位点必须位于SP6启动子下游。三是需要转录的DNA序列的下游端不要是3’突出。如果是3’突出（如选择了Pst I来线性化质粒），则用T4 DNA聚合酶修平。四是必须保证DNA模板中没有RNase。由于提取质粒DNA的过程中一般要使用大量的RNase A，因此质粒DNA一般都有严重的RNase A污染，所以在用作模板前，采取胶回收得方法回收质粒DNA。并且加入少量总RNA一起保温，然后电泳检测RNA是否被降解，以此判断纯化的DNA模板是否有残留RNase A。

二、体外转录反应

1. 在一个RNase-free 的塑料离心管中，在室温下（不是在4℃下）按次序加入下列成分

注：此为20 uL反应体系的用量，对其他反应体系，各成分的用量可以按比例增减。如果需要标记RNA探针，则需要订购NTP分开的试剂盒。如果需要得到加帽RNA，则需要加入自备的加帽修饰核苷酸（本公司有各种加帽修饰核苷酸）。

2. 37℃保温1-2小时。注意：延长保温时间并不能提高产量。

3. 70℃加热10分钟灭活SP6 RNA聚合酶。

4. 取1-3uL电泳检测转录效果。一般1 ug DNA可以合成 5-10 ug的RNA。

5. 得到的RNA可以放-80℃保存。

注：若需进一步去除DNA模板，可参考下列操作步骤，但所用试剂需另行购买，本试剂盒不提供。

1. 在体外转录体系中加入3-5 U自备的 RNase-free DNase（BTN90903；3-5 U/uL）。

2. 37℃保温15-30分钟。

3. 补水到100 uL。

4. 用等体积（100 uL）的Tris饱和酚-氯仿抽提去除残留的DNase和RNA聚合酶。

5. 在上清中加200 uL自备的微量核酸沉淀剂（CAT#50903；用前需要摇晃混匀），振荡后15000 rpm离心3-5分钟，弃上清。

6. 加入1 mL 75%乙醇，震荡10秒后15000 rpm离心3-5分钟，弃上清。

7. 短暂离心数秒，用枪头吸弃上清。

8. 晾干半分钟，所得沉淀即去除DNA模板后的RNA。可溶于RNase-free水中后立即使用或放-80℃长期保存。