构建cDNA文库、蛋白质的体外翻译和RT-PCR方法检测稀有的mRNA等研究常常需要从总RNA中分离mRNA，mRNA只占总RNA的1%左右，但由于带poly（A）尾巴，所以可以通过与Oligo（dT）纤维素的亲和结合而与其他RNA（如rRNA、tRNA等）分离开。本产品专门用于从总中提取mRNA，它具有下列特点：

1. 一站式，由柱式动物RNA提取试剂和mRNA提取试剂两个产品整合而成，即开即用，非常方便。

2. 可以处理50-100 mg的动物组织，能得到约10-15 ug总RNA，从中可得0.1-0.5 ug 左右的mRNA。

3. Oligo（dT）纤维素吸附能力强，每克可以吸附50-80 OD的mRNA，相当于2000-3000 ug mRNA。

4. mRNA提取过程操作简单，只需要离心就可以完成，免去了常规的灌柱、洗柱等繁琐操作。

5. 得到的mRNA可以直接用于构建cDNA文库、蛋白质的体外翻译和RT-PCR。

常温运输，4℃保存，Oligo(dT)纤维素长期放置放-20℃，有效期一年。

使用方法;

本产品提供本产品提供25 mg Oligo(dT)纤维素，每克Oligo(dT)纤维素能够结合50-80 OD的mRNA。

1. 在一个1.5 mL塑料离心管中称取1 mg Oligo (dT)纤维素。将0.5 mL结合液加入到一管装有1 mg Oligo (dT)纤维素的离心管中，混匀后室温放置5分钟。也可以将250 uL 结合液加入到装有25 mg Oligo(dT)纤维素的离心管中，每次取10 uL（相当于1 mg Oligo (dT)纤维素）与0.5 mL结合液混匀，室温放置5分钟。剩余部分放-80℃保存。

2. 200 g离心30秒，小心吸弃上清后留Oligo (dT)纤维素沉淀待用。

3. 将自备的总RNA 100 uL（如果体积不足100 uL，用水补足），65℃加热5

分钟。

4. 加入等体积的结合液，混匀后冷却到室温后，全部转移到装有Oligo(dT)纤维素的离心管中。

5. 混匀后室温放置5分钟，期间颠倒混匀数次。

6. 4℃ 200 g离心5分钟，小心将上清转移到一个离心管中。此上清液是去除了mRNA的总RNA。可以冰箱保存作为阴性对照。

7. 加入0.5 mL结合液，混匀后4℃ 200 g离心5分钟，小心弃上清。

8. 重复上步2-4次。

9. 加入50 uL 无RNase水，混匀后4℃ 200 g离心5分钟，小心收集上清（mRNA）。

10. 重复上步1-3次。

11. 将各次收集的mRNA混合，即为mRNA溶液。

12. 按微量核酸沉淀剂的方法沉淀mRNA，具体操作如下：

13. 按2:1的比例将本产品与mRNA溶液混合。注意：微量核酸沉淀剂取用前需要摇匀。

14. 室温15000 g离心10分钟(如果核酸含量在2 ng以下，建议离心30分钟)。

15. 弃上清后加75%乙醇1 mL，振荡混匀。

16. 15000 离心3-5分钟，弃上清。

17. 再短暂离心后小心吸弃上清，沉淀即为回收的mRNA沉淀，可溶于RNase-free水中。