核酸外切酶I说明书

发布时间:2017/5/11 15:23:00

E.coli核酸外切酶I(Exonuclease I)是一个分子量为54.5kDa的酶,具有单链特异性3’→5’核酸外切酶活性,可以从单链DNA的3’-OH末端逐个分子切下5’-单核苷酸。本酶对单链DNA的特异性非常高,不分解双链DNA及RNA。可通过80℃ 20分钟的热处理使之失活。此产品特点是:

1. 纯化PCR产物用于测序或megaprimer PCR。对PCR产物进行测序时,残存引物和dNTP会干扰测序反应,使用本产品可降解多余的引物,与SAP(BTN120403)同时使用还可降解多余的dNTP,所得PCR 产物可不经过精制直接

进行测序反应。

2. 在反应液中去除带3’-OH末端的单链DNA片段。

3. 不能酶切被磷酸化或乙酰化保护的3’-OH末端。

低温运输,-20℃保存,有效期半年。

酶储备液:

20 mM TrisHCl,pH7.5, 0.5 mM EDTA, 1 mM DTT, 50%甘油。

10×核酸外切酶I Buffer:

670 mM Glycine-KOH,pH9.5,10 mM DTT, 67 mM MgCl2。

活性单位定义:

以热变性的小牛胸腺DNA 为底物, 在37 ℃ 、pH9.5 的条件下, 30分钟内产

生10 nmol的酸可溶性物质所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。

热失活:

80℃ 20分钟。

来源:

E.coli NM554 exo I基因在重组E.coli菌种中表达纯化而得。

纯度:

25 U的本酶和1 μg的λDNA-Hind III片段在37℃、pH7.5的条件下反应16小时,

DNA的电泳谱带不发生变化。

25 U的本酶和1 μg的Closed circular(RFI)pBR322 DNA 在37℃、pH7.5的条

件下反应16小时,DNA的电泳谱带不发生变化。

25 U的本酶和1 μg的M13 mp18 ssDNA在37℃、pH7.5的条件下反应16小时,

DNA的电泳谱带不发生变化。

25 U的本酶和1 μg的16S,23S rRNA在37℃、pH7.5的条件下反应16小时,RNA

的电泳谱带不发生变化。