柱式细菌RNA提取试剂盒说明书

发布时间:2017/5/11 14:58:00

产品特点:

本产品是细菌 RNA提取试剂盒 (BTN51102)的柱式升级产品,用于快速 从各种常见的革氏阴性细菌中提取总 RNA。如需提取革氏阳性细菌的RNA,可以选择柱式真菌RNA提取试剂盒。跟细菌 RNA提取试剂盒相比 它具有下列特点:

1. 操作更加简单快速,省去了最费时的离心步骤。

2. 所得 RNA 纯度更高,OD260/OD280 一般在 2.0 左右.

3. 一般不含基因 DNA 污染。

4. 适用于各种革氏阴性细菌。

5. 性价比高于进口同类产品。

常温运输,4℃保存,有效期一年。

使用方法:

下面的操作步骤是针对在 1.5 mL 塑料离心管中进行的微量提取的。

1. 新鲜配制裂解液。将溶液 A 和溶液 B 按 1:1 的比例混合。注意:溶液 A 和溶液 B 混合后必须立即使用,不要放置,否则会产生沉淀。处理 1.5mL 左右的细菌需要 0.6mL 新鲜配制的裂解液(即 0.3mL 溶液 A 和

0.3mL 溶液 B 的混合液)。

2. 在 1.5 mL 塑料离心管中离心收集 0.2-1.5 mL 新鲜细菌。注意:由于细菌 RNA 半衰期十分短,所以,必须使用鲜的、处于对数生长期的细菌。

3. 吸尽液体培养基,加入 0.6mL 新配制的裂解液,用枪充分吹打细菌沉淀, 确保细菌全部裂解,没有块状物。

4. 将裂解物转移至一个干净的 1.5 mL 塑料离心管中,然后加入 0.2 倍体积 的自备氯仿(1 mL 裂解物需 0.2 ml 氯仿),振荡器上充分振荡混均 30 秒。

5. 12000-15000 g 室温离心 3-5 分钟。

6. 将上清液(约 0.6-0.8 mL)转移到离心吸附柱中。注意:离心后下层有 机相和中间层含有 DNA 和蛋白质,避免触及,否则将产生蛋白质和 DNA污染。为保险起见,可以留下 100 uL 上清液不取。同时吸取上清时下面的操作步骤是针对在 1.5 mL 塑料离心管中进行的微量提取的。

1. 新鲜配制裂解液。将溶液 A 和溶液 B 按 1:1 的比例混合。注意:溶液 A 和溶液 B 混合后必须立即使用,不要放置,否则会产生沉淀。处理 1.5mL 左右的细菌需要 0.6mL 新鲜配制的裂解液(即 0.3mL 溶液 A 和0.3mL 溶液 B 的混合液)。

2. 在 1.5 mL 塑料离心管中离心收集 0.2-1.5 mL 新鲜细菌。注意:由于细菌 RNA 半衰期十分短,所以,必须使用鲜的、处于对数生长期的细菌。

3. 吸尽液体培养基,加入 0.6mL 新配制的裂解液,用枪充分吹打细菌沉淀, 确保细菌全部裂解,没有块状物。

4. 将裂解物转移至一个干净的 1.5 mL 塑料离心管中,然后加入 0.2 倍体积 的自备氯仿(1 mL 裂解物需 0.2 ml 氯仿),振荡器上充分振荡混均 30 秒。

5. 12000-15000 g 室温离心 3-5 分钟。

6. 将上清液(约 0.6-0.8 mL)转移到离心吸附柱中。注意:离心后下层有 机相和中间层含有 DNA 和蛋白质,避免触及,否则将产生蛋白质和 DNA污染。为保险起见,可以留下 100 uL 上清液不取。同时吸取上清时