产品特点：

由于土壤中有机质含量丰富，尤其是其中的腐殖酸对 RT-PCR 等后续反应有 极大的抑制作用，所以从土壤微生物提取高纯度的 RNA 一直是十分棘手的问题。 它具有下列特点：

1. 操作简单快速，处理一个样品只需要约十几分钟。

2. 去污染效果好，RNA 纯度更高，平均 OD260/280 一般都在 2.0 左右。

3. 得到的 RNA 可直接用于 RT-PCR、Northern 杂交、cDNA 合成等实验。 4. 性价比高于进口的土壤 RNA 提取产品。

5. 试剂无毒无害, 环保。

常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：

1. 称取 0.1-0.5 g 的土壤，加入 1 mL 溶液 A，震荡器上剧烈震荡 5-10 分钟。 注意:一定要让管底的土壤震荡起来。注意：溶解溶液 A 沉淀。溶液 A 在 4℃ 放置后可能会产生沉淀，使用前必须放在 65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇 匀后再取用。

2. 稍微静置后将上清液转移至一个干净的 1.5 mL 塑料离心管中。

3. 在离心管中加入 0.3 mL 的溶液 B 和 0.2 mL 自备氯仿，在振荡器上振荡 30 秒混匀。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。

4. 室温 12000 rpm 离心 3-5 分钟。

5. 将上清液（约 0.6 mL）转移到另一干净的 1.5 mL 塑料离心管中，下层有机 相和中间层含有 DNA、蛋白质和其他杂质，避免触及或吸取。留下 100 μL 上清液不取。

6. 在上清液中加入 0.5 mL 的溶液 C 和 0.2 mL 的自备氯仿，用手上下颠倒或振 荡器振荡 30 秒混匀，此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶

液震荡起来。

7. 室温 12000 rpm 离心 3 分钟，两相间将有白色膜状物（蛋白质）形成。

8. 将上清液（约 1 mL）转移到另一干净的 1.5 mL 塑料离心管中,避免触及或吸

取有机相及其上面的白色膜状物。

9. 在上清液中加入 0.5 倍体积的溶液 D，用手上下颠倒或振荡器振荡 30 秒混匀，

此时溶液呈白色浑浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。

10. 13000-15000 g 室温离心 5-30 分钟，小心移弃上清液，避免触及管底大量的

白色 RNA 沉淀。

11. 在离心管中加入 1 mL 75%乙醇，振荡器上振荡混均 30 秒。室温离心

13000-15000 g 1 分钟，RNA 此时在管底形成细小沉淀。小心吸弃上清液，

注意不要吸弃 RNA 沉淀。

12. 重复第 11 步的 75%乙醇清洗步骤。

13. 短暂快速离心数秒使管壁上残留液体沉到管底（约 50 μL），用移液枪小心吸

弃，注意不要吸弃沉淀。此步十分重要，因为残留的乙醇会影响后续反应。

14. 室温短暂放置 2 分钟，立即加入适量（一般为 10-30 μL）RNA 溶解液使 RNA

沉淀溶解。注意:千万不要用真空离心法使 RNA 沉淀过于干燥，否则 RNA 将

变得十分难溶。RNA 样品可以直接使用，也可以存放于-80℃长期保存。

15. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做 Northern 杂交，强烈建议用户使用甲醛

变性胶 进行 RNA 电泳 ，因为非变性胶不能分离所有 的 RNA 分子

（BioTechniques，28：414，2000）。

16. RNA 产量产率测定：将 5-10 μL RNA 溶于 TE 缓冲液中（pH7.5-8.2 之间）

检测其在 OD260 的光吸收。通过光吸收可以得出 RNA 浓度（1 OD260 的

RNA=40 μg/mL），进而计算出 RNA 的产量（浓度 X 体积）和产率（RNA

产量/组织用量）。

17. RNA 纯度测定：无污染的总 RNA 的 OD260/OD280 一般在 1.8-2.1 之间（具

体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关），高于此范围则分别表示样

品可能有蛋白质污染，但一般不影响 RT-PCR 等反应。