黄曲霉素B1试剂盒

发布时间:2018/4/10 15:49:00

产品名称: 黄曲霉素B1试剂盒 
产品货号: wi106812
产    地: 美国
发布时间: 2016-03-11 14:49:39
点击放大
详 细 说 明

1.概述

黄曲霉毒素B1酶联免疫反应测试盒是用于检测谷类,饲料,肌肉,牛奶,花生和阿月浑子(开心果)油脂中黄曲霉毒素B1的残留。该试剂盒特点包括:

?         高回收率(80-105%),快速(10-20分钟)。

?         高灵敏度(0.05ng/g或ppb)

?         高重现性。

?         快速的ELISA检测方法(在不考虑样品数量下只需不到1.5小时)。

2.试剂盒原理黄曲霉毒素B1酶联免疫反应测试盒基于竞争性酶联反应原理,抗原已经包被于微孔板上。分析时,样品同一抗加入孔中,如果样品中含有毒素,会竞争抗体,因而抑制板上包被的毒素与抗体结合。HRP标记的二抗,与结合在板上一抗相结合后,加入TMB底物,底物的颜色显色强度与样品中毒素的含量成反比。

3.试剂盒组成

内容物

规格

保存

黄曲霉B1包被板(Aflatoxin B1 Coated Plate)

96孔板(12×8 孔)

2-8℃

黄曲霉毒素B1标准品(Standards):

0ng/ml阴性质控(Negative control)

0.05ng/ml

0.1ng/ml

0.2ng/ml

0.4ng/ml

0.8 ng/ml

回收用100ng/ml(Spiking,可选)

 

1.0mL

1.0mL

1.0mL

1.0mL

1.0mL

1.0mL

1.0mL

2-8℃

黄曲霉毒素B1一抗(Aflatoxin B1 Antibody #1)

12mL

2-8℃

 

HRP-酶标二抗(HRP-Conjugated Antibody #2)

18mL

2-8℃

20×浓缩洗液(Wash Solution)

30mL

2-8℃

终止液(Stop Buffer)

14mL

2-8℃

TMB底物(Tmb Substrate)

10mL

2-8℃

饲料提取浓缩物

60g

2-8℃

饲料清洗混合物

6g

2-8℃

 

本试剂盒应当在2-8℃的温度下储存,有效期为一年。如果一个月内不使用试剂盒,黄霉素毒素B1标准品,一抗和HRP-二抗应置于-20℃或者冷冻保藏。

4.检测限

检测物质

检测下限(ng/g)

干肉/鱼,谷类,饲料,种子

0.5(快速提取)2.5(有机提取)

肌肉/肝脏/肾脏

0.5

牛奶

0.5

花生酱

0.5

蔬菜/豆类/花生/橄榄油

0.25

 

5.交叉反应

药物

交叉反应率(%)

黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1)

100

黄曲霉毒素B2(Aflatoxin B2)

49

黄曲霉毒素M1(Aflatoxin M1)

45

黄曲霉毒素M2(Aflatoxin M2)

24

黄曲霉毒素G1(Aflatoxin G1)

37

黄曲霉毒素G2(Aflatoxin G2)

8

 

6.其他需要而本试剂盒未提的设备或材料

1)        酶标仪(450nm)

2)        恒温培养箱

3)        匀质器

4)        漩涡振荡器

5)        微量加样器(10、20、100和1000mL各一支)

1)        多道枪:50-300mL

2)        甲醇

7.注意事项

实验前请阅读以下文字,以保证获得实验效果。

1)        标准品中含有黄曲霉毒素B1,请小心使用。

2)        不要使用过期的试剂盒。

3)        不同批次的试剂盒不要混用,抗体和微孔板具有盒与批次的特异性。确保二抗及二抗稀释液正确配制。

4)        尽量保持室温20-25℃,避免在通风口操作防止温度过低,过热和/或者蒸发。同样的,不要在阳光直射下实验,防止过热及蒸发。在孵育期间,如果工作台温度过低,应该铺垫若干纸巾或者其他物料。

5)        水质量很重要,确保使用蒸馏或者去离子水。

6)        加入样品或者试剂到空的微孔板时,吸嘴靠于微孔接近底部,并保持接触。

7)        孵育时间的计算越规范越好,保持添加标准品的一致性,先添加标准品后添加样品。

8)        从低浓度到高浓度地添加标准品,降低影响标准品曲线质量的风险。

9)        将微孔板置于放有干燥剂的密封袋中,冷藏保存。

8.样品的准备

样品保存在2-4℃不超过1-2天,如果需要保存较长的时间,应该放置-20℃。样品使用前应恢复到室温。

1x饲料提取液的制备

将饲料提取浓缩物60g倒入200ml 容量瓶中,加入180ml蒸馏水,涡流2分钟混匀,室温下静置20分钟,容量瓶底部有少量结晶是正常现象,不影响使用。

1)  干肉/鱼,谷类,饲料,种子(花生)

快速提取方法

1)      研磨并混匀适量的样品;

2)      称取5g磨碎的样品,放入适当的容器中;

3)      加入25mL70%甲醇,用手或者振荡器剧烈振荡5分钟;

4)      室温(22.5±2.5)°C下4000 rpm离心10分钟;

5)      取100μL上清液加入1.9mL 35% 甲醇;

1)      取50μL作检测。

稀释倍数:100

备注:如果需要,样品所取的量可以增加,同时甲醇/水的用量也必须作相应的改变。例如取10g样品,应该加入50mL70%甲醇。

有机提取方法(针对高背景值样品或用快速提取回收率低的样品)

(1)             称取1g匀质样品,加入6ml 乙腈和2ml 1x饲料提取液;

(2)             转速涡流3分钟或震荡20分钟;

(3)             室温下4000g离心10分钟,取1ml上清到新试管中;

(4)             加入50mg 饲料清洗混合物,涡流30秒,室温静置5分钟;

(5)             室温下4000g离心10分钟,

(6)             转移120μL上清到新的试管中,50-60°C水浴中氮气吹干;

(7)             加入1ml 35%甲醇,涡流2分钟;

(8)             取50μL作检测。

稀释倍数:50

备注:如果样品含量低,第6步可以取600μL上清液,稀释倍数是10。

2)肌肉/肝脏/肾脏

(1)         研磨并混匀适量的样品;

(2)         称取5g磨碎的样品,放入适当的容器中;

(3)         加入25mL70%甲醇,用手或者振荡器剧烈振荡20分钟;

(4)         室温(22.5±2.5)°C下4000 rpm离心10分钟;

(5)         取1mL上清液,加入1mL蒸馏水或者去离子水稀释;

(6)         取50μL作检测。

稀释倍数:10

备注:如果需要,样品所取的量可以增加,同时甲醇/水的用量也必须作相应的改变。例如取10g样品,应该加入50mL70%甲醇。如果样品中黄曲霉毒素含量很高,那么样品必须经过稀释,请用35%甲醇进行稀释。

3)花生酱

(1)  研磨并混匀适量的样品

(2)  称取2g匀质的样品,放入适当的容器中

(3)  加入4mL35%甲醇,用手或者振荡器剧烈振荡20分钟

5±2.5)°C下4000 rpm离心10分钟

(5)  取50μL作检测

   稀释倍数:3

4)牛奶

(1).脱脂牛奶:用35%甲醇按1:9的比例稀释牛奶样品(20ul牛奶+180ul35%甲醇),取50ul稀释样品以待检测

(2).含脂牛奶:取适量样品,室温(22.5±2.5)°C4000g离心5min,弃去上层脂肪层,用35%甲醇按1:9的比例稀释牛奶样品(20ul牛奶+180ul35%甲醇),取50ul稀释样品以待检测

稀释倍数:10

5)蔬菜/豆类/花生/橄榄油

(1) 称取0.5g样品,加入2.5ml35%的甲醇;

(2) 涡流10分钟或高速涡流3分钟;

(3) 室温下4000g离心10分钟;

(4) 取600μL下层澄清液,加入1ml 正己烷,涡流1分钟,静置5分钟;

(5) 室温下4000g离心5分钟,去除上层正己烷;

(6) 取50μL下层液作检测。

    稀释倍数:5

9.酶联免疫反应测试步骤

试剂准备

注意:试剂在使用之前要在室温下解冻1-2小时,确定在使用前阅读过注意事项。准备适量的检测用试剂,所有的试剂摇匀后使用。准备足够所有小管所需的用量,不能将试剂倒回原来的瓶子中,处理试剂时建议用废弃的瓶子以降低污染的风险。

1x洗液的制备

1体积的20x洗液同19体积的蒸馏水混合

检测:

以下为计算份量的表格,用户可根据自己的需要来确定需要配置多少试剂。

试剂

每个反应需要的体积

24次反应的体积

一抗

100 mL

2.4mL

二抗工作液

150 mL

3.6mL

工作洗液

2 mL

48 mL

终止液

100 mL

2.4 mL

底物

100 mL

2.4 mL

 

(1)         加入50mL的标准液于所设定的孔中;

(2)         加入50mL的样品于所设定的孔中

(3)         在每孔中加入100mL一抗, 轻敲微孔板边缘混匀60秒;

(4)         室温(22.5±2.5)°C避光孵育30分钟

(5)         洗板3次,每次加入250mL 1×洗液,尽量甩干并在吸水纸上吸干;

(6)         每孔加入150mL 1×二抗工作液,室温(22.5±2.5)°C避光孵育30分钟

(7)         洗板3次,每次加入250mL 1×洗液,尽量甩干并在吸水纸上吸干;

(8)         每孔加入100mL的TMB底物,用手敲板边缘1分钟混合均匀;

(9)         室温(22.5±2.5)°C避光孵育15分钟, 加入100mL的终止液终止反应。

(10)      在450nm下读OD值(读数前,用无绒布擦拭除去微孔底部的水分和指痕)。

10.结果计算

(1)         分别计算标准、质控和样品的平均吸光度值和相对吸光度值。

(2)         相对吸光度值 (%) = (标准或样品吸光度值/零标准吸光度值) ′ 100

(3)         以相对吸光度值为纵坐标,标准浓度为横坐标建立标准曲线。

(4)         从标准曲线上读取质控和样品的浓度值。