梯度液相色谱仪
梯度液相色谱仪（Gradient Liquid Chromatography,GLC）是一种高效液相色谱（HPLC）技术，通过改变流动相的组成比例来提高分离效率。
优点
1.提高了复杂样品中各组分的分离效果。
2.缩短了分析时间，提高了工作效率。
3.对于宽范围的样品适用性强，灵活性高。
组成结构
1.泵：用于输送流动相，必须能够精确地混合溶剂并维持稳定的压力。
2.自动进样器：实现样品的自动化进样，确保重复性和准确性。
3.柱温箱：保持色谱柱温度恒定，有助于提高实验结果的一致性。
4.检测器：如紫外-可见光检测器、荧光检测器、质谱检测器等，用于检测流出物中的目标化合物。
5.数据处理系统：收集和处理来自检测器的数据，并生成报告。
工作原理
1.流动相的选择与制备：在梯度洗脱过程中，使用两种或多种溶剂作为流动相，并且这些溶剂具有不同的极性或其他物理化学性质。根据分析需求，预先设定好流动相的变化程序，比如从低极性到高极性的渐变。
2.泵的作用：高压泵负责精确地输送流动相通过系统。在梯度洗脱模式下，泵不仅要提供稳定的流速，还需要能够按照预定的程序混合不同的溶剂，从而实现流动相组成的连续变化。
3.进样：样品被注入到流动相中，然后被带入色谱柱。自动进样器可以保证每次进样的准确性和重复性。
4.色谱柱内的分离过程：当样品进入色谱柱后，由于流动相组成的逐渐变化，不同组分依据它们各自的化学性质（如极性、溶解度等）与固定相和流动相之间的相互作用力不同，在色谱柱内得到不同程度的保留和洗脱。这种策略使得即使是非常相似的化合物也能被有效地分开。
5.检测器：随着流动相携带被分离的化合物流出色谱柱，检测器会实时监测并记录每个峰的位置和强度。常用的检测器包括紫外-可见光检测器、荧光检测器、电导检测器和质谱检测器等。
6.数据分析：数据处理软件接收来自检测器的信息，生成色谱图，并进行定性和定量分析。用户可以根据色谱图中的峰位置确定物质的身份，通过峰面积或高度计算其浓度。
使用方法
一、准备阶段
1.选择合适的色谱柱
根据待分析样品的性质选择适合的固定相和尺寸的色谱柱。
2.配置流动相
根据样品特性设计梯度程序，包括初始流动相比例、最终比例、梯度时间等。
使用高质量溶剂，并确保其纯度符合要求，避免引入杂质影响分析结果。
3.样品制备
将样品溶解于适当的溶剂中，确保浓度适中，既不过浓也不过稀。
过滤样品溶液以去除可能堵塞系统的颗粒物。
4.系统检查与准备
检查所有连接是否紧固，特别是泵头、进样器、色谱柱两端以及检测器之间的连接。
清洗系统，用甲醇或其他推荐溶剂冲洗整个流路，排除气泡并清洁管道。
二、实验操作
1.设置参数
在仪器控制软件中输入预设的梯度程序和其他必要参数，如流速、温度、检测波长等。
确认自动进样器设置正确，包括进样体积、位置等。
2.平衡系统
开始运行前，先让系统在起始流动相比例下稳定一段时间（通常至少10分钟），直到基线平稳。
3.进样与开始实验：
通过自动进样器或手动方式将样品注入系统，启动梯度程序。
监控实时数据，观察各组分的分离情况及峰形。
4.记录数据
实验过程中，软件会自动记录每个峰的时间、高度和面积等信息。
结束后保存数据文件，以便后续分析。
三、数据处理
1.数据分析
利用专用软件对采集的数据进行处理，识别各个峰对应的化合物。
计算峰面积或高度，用于定量分析。
2.报告生成
根据需要编制实验报告，包含样品信息、实验条件、结果分析等内容。
四、维护保养
1.定期维护设备，包括更换密封件、清洗或更换过滤器、定期校准检测器等。
2.注意日常清洁工作，尤其是进样口和色谱柱，防止污染积累影响下次实验。
应用领域
1.制药行业：药物研发、质量控制、杂质分析等。
2.食品安全：农药残留检测、添加剂分析等。
3.环境科学：污染物监测、水质分析等。
4.化学工业：产品纯度检验、反应监控等。
5.生命科学研究：蛋白质组学、代谢组学研究等。