微囊藻毒素酶联免疫试剂盒

(货号：OunuoAT91001)

一、原理
  微囊藻毒素酶联免疫试剂盒，采用间接竞争法。酶标板微孔中预包被microcystin抗原，样品中残留的microcystin与微孔板上的抗原竞争microcystin抗体，加入酶标二抗后，用TMB显色，吸光值与样品中microcystin含量成负相关。

二、酶联免疫分析程序
1. 测定之前注意事项
1) 使用前将所有试剂平衡至室温（20-25℃）。
2) 使用后迅速将试剂放入2-8℃冷藏。
3) 在ELISA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性，正确的洗板操作是ELISA测定程序的要点。
4) 所有孵育过程应避免阳光直射，并按要求用盖板覆盖住酶标板。
2. 溶液的配制
1) 洗涤液的配制：将浓缩洗涤液用去离子水稀释10倍后使用（1份浓缩洗涤液加9份蒸馏水）。
3. 测定程序
1) 将足够标准品和样品所用数量的孔条插入酶标板架，标准品和样品做两个平行实验，记录下标准和样品的位置。未使用的酶标板用铝箔袋封好置2-8℃冷藏保存。
2) 分别吸取50μL 标准品和样品加至相应的微孔（双孔）中，然后各加入50μL微囊藻毒素抗体加盖，室温温育30分钟（每个标准和样品必须使用新的吸头）。
3) 倒出孔中的液体，将微孔架倒置在吸水纸上拍打以保证完全除去孔中的液体，然后每孔加入250μL 稀释好的洗涤液洗涤，振荡后倒出孔中的液体，拍干；重复操作四次，洗板时每次间隔30秒，洗完后用力在吸水纸上拍干。
4) 加入100μL酶标二抗抗体加盖，室温温育30分钟（每个标准和样品必须使用新的吸头）。
5) 倒出孔中的液体，将微孔架倒置在吸水纸上拍打以保证完全除去孔中的液体，然后每孔加入250μL 稀释好的洗涤液洗涤，振荡后倒出孔中的液体，拍干；重复操作四次，洗板时每次间隔30秒，洗完后用力在吸水纸上拍干。
6) 每孔加入100μL底物， 室温避光温育10分钟。
7) 每孔加入50μL终止液，混匀。
8) 置于酶标仪中，振荡混匀，在450nm处测定吸光度值（OD值），参比波长630nm。（iELisa全自动酶标仪可以直接读出、打印浓度值）。
三、  结果判定（微囊藻毒素试剂盒）
1. 所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值（B）除以（0标准）的吸光度值（B₀）再乘以100%，即百分吸光度值。 以微囊藻毒素准品浓度值（ppb）为X轴，百分吸光度值为Y轴，绘制标准曲线图。相对应每一个样品的浓度可以从标准曲线上读出。也可以用回归方程法，计算出样本溶液浓度。利用计算机专业软件，更便于大量样品的快速分析。

2. 样品的实际浓度为读数结果乘以相应稀释倍数。
3. 如果测定值超出检测范围，样品提取溶液按一定的比例用稀释缓冲液进行稀释。
四、检测方法灵敏度、准确度、精密度（微囊藻毒素试剂盒）
1. 精密度:批内变异系数<10%（n=10），批间变异系数<25%(n=10)。
2. 灵敏度：0.075ng/mL。
3. 样本检测线：
饮用水、地表水........................................0.075ng/mL
海水          ..........................................0.75ng/mL
4. 准确度:
饮用水、地表水 .......................................90%±25%
海水 ........................................................ 90%±25%