河豚毒素ELISA试剂盒
货号：Ounuo97001

 
河豚毒素ELISA试剂盒，本品采用竞争性酶联免疫检测技术用于鲀鱼类肌肉、肝脏、皮肤等样本中河豚毒素的定量分析，可满足96次测试，在做复孔的情况下，一次最多可检测42个样本。

一、样本前处理：

一般来说，组织样本在2-8℃最多保存1-2天，如长时间不用，建议分装成适量小份于-20或-80℃保存，请勿使用反复冻融的样本。【注释：废弃的阳性样本应作为有毒废弃物处理】

准备

(1) 样本提取液

        分别量取甲醇40mL、蒸馏水60mL、冰乙酸0.1mL混匀。

 (2) 1×样本稀释液

     按1份体积4×样本稀释液和3份体积的蒸馏水混匀。

 鱼肉、肝脏、鱼皮

(1) 称取2g均质的样本于一合适的容器中，加入10mL样本提取液涡旋30s;

(2) 放置于90℃水浴中10min，期间手摇样本3次；

(3) 自来水降温1min，加入1mL正己烷涡旋30s；4000rpm，离心5min；

(4) 取中间层清液100μL，加入300μL 1×样本稀释液混匀，取50μL点样

稀释倍数：20
二、检测步骤（河豚毒素ELISA试剂盒）

检测前准备

1.所有试剂需回复至室温（在20-25℃下，从试剂盒中取出并放置1-2h）;

2. 检测开始前需准备好所需试剂；

3. 取出所需体积的试剂，其余放回盒内；

4. 未使用完的试剂请勿倒回原试剂瓶内，移取每一种试剂需更换吸头，以免交叉污染；

5. 请不要在通风口、阳光直射下检测，以避免造成微孔微环境差异导致检测失败；

6. 标准品、阳性样本以及用过的吸头和器皿均应做有毒废弃物处理。

洗液（1×）配制

取1体积的20×浓缩洗液，加入19体积的去离子水或蒸馏水混匀

三、检测步骤（河豚毒素ELISA试剂盒）

(1) 移取50μL河豚毒素标准品至相应微孔中；

(2) 移取50μL样本至相应微孔中；

(3) 移取50μL酶结合物至所有微孔中；

(4) 加入50μL河豚毒素抗体至每一所需微孔中，用手指肚轻轻敲击微孔板架两侧混匀1min；

(5) 室温（20-25℃）孵育30min；

(6) 甩干微孔板，加入300μL 洗液（1×），浸泡5s后倒出洗液，再重复4次，甩干并于无尘布上拍干；

(7) 加入100μL底物，室温（20-25℃）避光孵育15min;

(8) 加入100μL终止液，于450nm下读数

四、结果计算

（1）以logit(B/B0）为y轴，以log（分析物浓度）为x，进行线性拟合。

其中公式如下

logit(B/B0)=k ln?〖(concentration)+c〗①

B为标准品或样本对应的吸光度；

B0为零标准品对应的吸光度；

logit(B/B0)=〖ln(〗?〖(B/B0)/(1-B/B0))〗;

K为斜率；

C为截距

（2）计算出样本的平均吸光度和样本的B/B0值代入公式①中求出浓度并乘以对应的稀释倍数，即为样本中待测物最终浓度