西尼罗河病毒IgM检测试剂盒
价格:1.00
地区:广东省 广州市
电 话:13710007117
手 机:13710007117

西尼罗河病毒IgG检测试剂盒

【预期用途】

该试剂盒利用了西尼罗重组抗原检测人体血清或血浆中的西尼罗抗体。本实验仅用于辅助诊断人感染了西尼罗病毒,不用于筛查血液或血液成分。仅供专业人员体外诊断使用。

【前言简介】

感染了西尼罗病毒会导致包括脑炎等一系列症状的疾病,西尼罗病毒在世界广泛传播,已在50多个国家检测出该病毒。本试验经CDC提供的试剂检验与验证。本试验使用了一种称为WNRA的重组抗原,它可以作为西尼罗病毒感染的快速血清学指标,WNRA蛋白是一种重组抗原,它是由含有西尼罗病毒两个抗原的序列多肽构成。 

【检测原理】

该试剂盒是基于两步夹心法原理。在该测定中,将微量滴定孔与标准品,质控或未知血清样品孵育。可以将血清样品与孔中添加的样品稀释缓冲液直接混合(另请参见以下说明)。洗涤后,将孔用对人IgG特异的抗体处理,并用辣根过氧化物酶(HRP)标记。在第二温育和洗涤步骤之后,将孔与四甲基联苯胺(TMB)底物温育。

然后加入酸性终止溶液,并通过在450纳米处的吸光度测量来确定底物的酶促转化程度。高于某个阈值时,WNRA和质控孔的吸光度之比可以准确确定是否存在针对WNV的抗体。提供一组阳性和阴性样品作为内部质控,以监测试剂盒的完整性。 

【试剂盒组成成分】

1.   微孔板:       (96孔 12x8)即用型,每孔均包被结合西尼罗重组抗原的单抗。2-8℃下保存至保质期。注意:WNRA和NCA已包被于微孔板。

2.   IgG样品稀释液:1×25ml,即用 2-8℃下保存至效期。

3.   IgG阴性质控:  1×30ul,2-8℃下保存至效期。要长时间储存,将其分装于小瓶里,在-70℃下储存。

4.   IgG阳性质控:  1×30ul,2-8℃下保存至效期。要长时间储存,将其分装于小瓶里,在-70℃下储存。

5.   洗涤液(10X):  1×120ml,2-8℃下保存至效期。

6.   EnWash:        1×20ml, 2-8℃下保存至效期。

7.   酶联物:        1×6ml,即用型,2-8℃下保存至效期。

8.   TMB底物液:   1×9ml,即用型,2-8℃下保存至效期。

9.   终止液:        1×6ml,即用型,2-8℃下保存至效期。

试剂应避免反复冻融。

【操作步骤】

在使用前将所有试剂和样品平衡至室温,并轻轻倒转使其充分混匀。

实验准备:

将10X的浓缩洗涤液稀释,将120ml的浓缩洗涤液加上1080ml的蒸馏水,摇匀,至无任何沉淀,稀释好的洗涤液最多可在室温下放置两个星期。

准备实验所需的板条,剩余的板条应尽快放入袋子里重新密封,在2-8℃下储存至保质期。 

操作步骤:

1.  标记将要使用的板条,注意微孔板已经按照统一排列,如下所述包被西尼罗抗原和质控抗原。

西尼罗抗原



板条#1

板条#2


A

WNRA

WNRA

B

WNRA

WNRA

C

WNRA

WNRA

D

WNRA

WNRA

E

NCA

NCA

F

NCA

NCA

G

NCA

NCA

H

NCA

NCA

2.  将血清样品﹑阴性质控和阳性质控同样地用样品稀释液按1:300稀释。

3.       每孔加入50ul稀释后的样品,以下为一个血清样品使用一个板条的典范。


板条1

板条2


血清样品




A

IgG N

样品1


B

IgG N

样品1


C

IgG P

样品2


D

IgG P

样品2


E

IgG P

样品2


F

IgG P

样品2


G

IgG N

样品1


H

IgG N

样品1






4.       封板,在湿润的温育器里37℃下温育1小时。

5.       温育后,用自动洗板机,使用洗涤液洗板6次。

6.       在每孔中加入50ul的酶联物。

7.       封板,在湿润的温育器里37℃下温育1小时。

8.       温育后,用自动洗板机,使用洗涤液洗板6次。

9.       每孔加入150ul的EnWash,在室温下温育5分钟

10.   温育后,用自动洗板机,使用洗涤液洗板6次。

11.   每孔加入75ul的TMB底物液。

12.   封板,在室温下,避光处温育10分钟。

13.   每孔加入50ul的终止液终止反应。

14.   在450nm处读取吸光率。

结果计算】

结果的变化将会非常大,以下结果仅供指引。

计算ISR值:

计算在同一实验里WNR抗原的两个阴性质控的平均值,计算同一实验里NC抗原的两个阴性质控的平均值,用WNRA/NCA,得出阴性质控的ISR值。同样地计算阳性质控和样品得ISR值,阳性质控的ISR值应高于3.0,阴性质控的ISR值应低于1.5。

结果的判断:

ISR

结果

解释

≤2.0

阴性

没有检测到IgG抗体

2.0-3.0

可疑

需确证实验

≥3.0

阳性

存在IgG抗体,建议做确定性实验

 

在某些特殊的例子中,曾报道有假阳性,但对梅毒病人无限制。假如样品的ISR值大于2.0,但是WNRA和NCA的OD值均偏低,可视为潜在假阳性。以下为样品1排除标准的范例。

排除标准:

计算阴性质控的WNRA和NCA值:


WNRA

NCA

.1

0.153

0.126

.2

0.125

0.110

总计

0.260

0.236

平均WNRA=0.260/2=0.130

     NCA=0.236/2=0.118

     ISR=0.130/0.118=1.10

任何阴性质控的ISR值高于1.5,则实验需要重做。

计算阳性质控的WNRA和NCA值:


WNRA

NCA

.1

0.635

0.190

.2

0.655

0.178

总计

1.290

0.368

平均WNRA=1.290/2=0.645

     NCA=0.368/2=0.184

     ISR=0.645/0.184=3.5

任何阳性质控的ISR值低于3.0,则实验需要重做。

以下标准是必需遵守的,不满足以下标准,试剂出现了质量问题或操作错误,实验需重做。

因素

范围

平均阴性质控读数

<0.400

平均阳性质控读数

>0.400

阳性质控的ISR值

>3.000

阴性质控的ISR值

<1.500


【解释结果】

1.       样品的ISR值大于3.0视为阳性。

2.       阳性结果需重做证明。

3.       样品的ISR值小于2.0视为阴性。

4.       样品的ISR值小于3.0但是大于2.0,视为未确定,但是很有可能阳性,实验需一式三份重做。

5.       ISR值大于2.0是因为WNRA和NCA的值都低造成的,应该视为潜在假阳性。

样品1低OD值的范例:
计算样品的WNRA和NCA值:


WNRA

NCA

1

0.044

0.190

2

0.016

0.007

总计

0.060

0.026

平均WNRA=0.060/2=0.030

   NCA=0.026/2=0.013

   ISR=0.030/0.013=2.31

虽然样品的ISR值高于2.0,但是本样品需视为假阳性,因为其OD值低,而且远远偏离了相关的标准品,这通常在空白值高的情况下发生。 

【局限性】

1. 样品的OD值高于抗原质控(非WNRA),导致ISR值小于3.0,则可能为假阴性,再释稀样品重新实验,可能会获得真正的ISR值。

2. 既然这不是一个直接检测的方法,则需考虑假阳性和假阴性存在的可能性。

3. 所有有反应的样品,应用确定性实验来证实。

4. 本实验提供的试剂,尽可能地检测血清或血浆中的WNRA反应性抗体水平。

5. 应避免反复冻融样品和试剂。

6. 不要使用溶血或脂血的样品,它们会导致错误的结果。

华南生物工程有限公司作为澳大利亚PANBIO、日本生研、Thermo、德国NOVATEC、德国赛维、德国Genecam、德国DRG、MERCKE、德国IBL、德国genekam、美国InBios、美国CORTEZ、美国FULLER、日本IBL、比利时CORIS等多家国际检测产品公司的中国代理商,希望能更好的满足您的需要,我们能够为您提供多品种、多方法、 多系列的检测产品,保证稳定快速供货。。

【仅供科研】


企业类型

制造商

新旧程度

全新

原产地

德国