美国Biostone塞尼卡谷测试剂盒
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美国Biostone塞尼卡谷测试剂盒

AsurDxTM Senecavirus A (SVA) Antibody Test Kit
一、概述

试剂盒用于检测猪血清或者血浆中Senecavirus A A (SVA)体。试剂盒原理是基于间接ELISA方法,酶标板上已经包被SVA蛋白重组原,添加样品后,样品内的体能与板上包被原特异性结合形成原体复合物,并与后面加入的酶标二结合,二上的酶再催化底物显色,显色深度与样品中的体含量成正相关。

 

二、试剂盒规格及组分

试剂盒组分

10039-02

10039-05

储存温度

原包被板SVA antigen-Coated Plate

2*96

5*96

4°C

阳性对照(红盖) Positive Control

2管

5管

4°C

阴性对照(白盖) Negative Control

0.2mL

0.5mL

4°C

酶标二HRP-Conjugated Antibody Solution

24mL

58mL

4°C

10X稀释液10X Diluent Solution

12mL

28mL

4°C

检测稀释液  Assay Diluent

20mL

50mL

4°C

20X洗板液  20X Wash Solution

56mL

120mL

4°C

T底物 T Substrate

24mL

58mL

4°C

终止液 S Solution

24mL

58mL

4°C

备注:如果试剂盒过一个月不使用建议性对照和酶标二-20°C储存。

三、试剂以及样品制备

1X稀释液:用9体积的蒸馏水稀释1体积的10X稀释液,得到1X稀释液。

1X洗板液:用19体积的蒸馏水稀释1体积的20X洗板液,得到1X洗板液。

样品血清/血浆预稀释:在血清稀释板上使用1X稀释液将样品血清稀释10倍,例如将20uL的血清加入到180uL的1X稀释液中混匀,备用。

阳性对照:取出回温30分钟后,每管加入65ul 1X稀释液,振荡混匀后备用,不使用时放于-20°C储存,反复冻融应不多于3次。

 

四、实验操作

试剂

每孔用量

检测稀释液

90 ul

样品/对照

10 ul

酶标二

100 ul

1X洗板液

2 ml

底物

100 ul

终止液

100 ul

1. 实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出回复室温;

2. 设置好对照及样品在原包被板的位置,孔中加入90ul 检测稀释液

3. 加入10ul的阳性对照到原包被板两个孔中;

4. 加入10ul的阴性对照到原包被板的另外两个孔中;(将阴性和阳性对照血清分隔加入,例如左上方加阳性对照,右下方加阴性对照)

5. 其他孔加入10ul预稀释的血清样品(已经预稀释了1:10).

6. 轻微振荡1分钟;

7. 封板,25°C孵育45分钟;(注意避免阳光直射和空气进入板中)

8. 弃去板中的液体;

9. 每孔加入250ul洗涤液洗板5次,请把板孔拍干;

10. 每孔加入100uL酶标二,封板,25°C暗处孵育30分钟;

11. 每孔加入250ul洗涤液洗板3次,请把板孔拍干;

12. 每孔加入100uL的T底物,室温下暗处孵育20分钟;

13. 每孔加入100uL终止液,然后酶标仪450nm读数;

 

结果判断

样品PP值=(样品OD值÷阳性对照OD值)*100

性:阴性对照的PP值须小于40%,阳性对照OD值的平均值须≥0.7

阴性:样品的PP值小于40%,样品血清中体阴性

阳性:样品的PP值大于40%,样品血清中体阳性

 

六、 问题与解决

1.标准品无颜色变化或者无相应数值

可能原因

解决方法

试剂使用顺序混乱,或者操作步骤出错。

遵循实验说明重复实验。

使用了失效的酶标原,

酶标原来自同一试剂盒,同一批次

T底物失效。

使用新的T底物。

 

2.低吸光度(OD值)

可能原因

解决方法

试剂过期,或者不同的批次混用。

查证过期试剂和批次。

洗液配制错误。

使用试剂盒提供的洗液,正确配制。

过多次洗涤。

按照说明书要求进行洗涤。

孵育时间过短。

按照说明书要求,严格计算好时间。

实验室温度过低。

保持实验室温度在(22.5±2.5)°C不要在空调风口或者寒冷的窗户旁进行实验。

试剂或者微孔板温度过低。

试剂或者微孔板回温,在实验开始前,将试剂放置盒子外少1小时。

使用错误波长读数,或者酶标仪失灵。

450nm波长读数,检查酶标仪。

试剂盒处于端的条件。

检查试剂盒从冰箱拿出使用的次数,检查试剂盒是否放置端温度(过冷或者过热)时间太长。

酶标板损坏

酶标板一直放置于有干燥剂密封的铝箔袋中置于冰箱保存,回温时也是放于铝箔袋回到室温。

3.过高的背景值或吸光度(OD值)

可能原因

解决方法

使用了质量差的水。

如果使用的水可疑,尝试使用蒸馏水配制洗液。

底物失效。

加入微孔板前,底物是无色的。

洗涤不当或者洗板机洗板效果不好。

采用说明书建议的洗涤次数,每次每孔至少加入250μL洗液。检查洗涤系统,排除故障。

酶标仪失灵。如果OD值读数很高而颜色很浅,那个这是可能的情况。

使用校正微孔板检查酶标仪,检查光源。

实验室温度过高。

保持实验室温度(22.5±2.5)°C,避免在热源或者阳光直射处实验。

试剂混淆,被污染或者配制不当。

使用正确的试剂,准确配制,避免污染。