乳制品中三聚氰胺的液相色谱检测法
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乳制品中三聚氰胺的高效液相色谱检测法

 

  乳制品中三聚氰胺的高效液相色谱检测法
  三聚氰胺(Melamine)是一种重要的三嗪类含氮杂环有机化工原料,主要用于生产三聚氰胺-甲醛树脂,广泛用于木材加工、塑料、涂料、造纸、纺织、皮革等行业,为白色晶体。三鹿奶粉事件引发了对三聚氰胺检测的广泛关注,国家质量监督检验检疫总局和国家标准化管理委员会相继发布了《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》(GB/T22388-2008)和《原料乳中三聚氰胺快速检测 液相色谱法》(GB/T22400-2008)的国家标准。本文参考了以上标准并进行配制条件优化,建立了乳制品中三聚氰胺的高效液相色谱检测法,前处理简单,检测限、精密度、重现性以及回收率均符合国家标准。

  1   实验部分
  1.1 仪器与试剂
  501-HPLC高效液相色谱仪(含UV501紫外-可见检测器1台,P501高压恒流泵1台,杭州赛析科技有限公司);DT-230A色谱柱温箱;FA2004分析天平(上海舜宇恒平科学仪器有限公司);TGL-16G-A离心机(上海安亭科学仪器厂);三聚氰胺标准品(>99%,上海安谱);辛烷磺酸钠(色谱纯,北京百灵威);磷酸(分析纯)、乙腈(色谱纯,美国Tedia)、纯净水(杭州娃哈哈)。
  1.2 标准品溶液配制
  精密称取三聚氰胺标准品,溶于50%的甲醇水溶液,配制称1.422mg/ml的标准储备液,于4℃避光保存。根据实验需要,用流动相逐级稀释成适当浓度的标准工作液。
  1.3 样品前处理
  称取2g酸奶样品与50ml具塞离心管中,加入乙腈:水=50:50混合溶液15ml,充分混匀后超声提取15min。取提取液250ul,加入0.1mol/l盐酸750ul,混匀,以12000r/min离心5min,取上清液,0.22um滤膜过滤,作为HPLC测定溶液。
  1.4 色谱条件:
  色谱柱:Globalsil C18 5μm(ID4.6mm×250mm)
  流动相:乙腈/缓冲盐=15/85(缓冲盐:10mM辛烷磺酸钠水溶液,含0.1%磷酸)
  流速:1.0ml/min
  波长:240nm
  温度:40℃
  进样量:20μl

  2   实验结果
  2.1 精密度实验
  取浓度为0.569μg/ml三聚氰胺标准工作液,按上述色谱条件,连续进样5次,以各成分峰面积计算RSD(%),所得结果如表1所示:保留时间相对标准偏差(RSD)为0.23%,峰面积RSD为0.57%。
                                                         表1 精密度实验

NO. Retention time(min) Peak High Peak Area
1 11..8
2 11..2
3 11..0
4 11..8
5 11..6
RSD(%) 0.23 0.82 0.57

 


                                  图1 三聚氰胺标准品

  2.2   标准曲线
  配置浓度分别为0.142、0.284、0.853、1.422、7.110、14.220μg/mL的三聚氰胺标准工作液。将以上6种标准工作液在上述色谱条件下按浓度由低至高进样。用小二乘法以对照品浓度(横坐标X轴,µg/ ml)对峰面积(纵坐标Y轴)进行线性回归,求算标准曲线。

  2.2   加样回收率和重现性实验
取已知三聚氰胺含量的酸奶样品,加入一定量的标准储备液,按“样品前处理” 操作,平行制备3份,得到样品溶液后按上述色谱条件进样分析,得到加样回收率及重现性结果,见表2。 Spiked(mg/kg) Recovery(%) RSD(%)
35.0 87.2 1.37

 

                                图2 空白酸奶样品

 

                                   图3 加酸奶样品

  2.2   检测限及定量限
  依据噪声值,按3倍信噪比,计算其理论检出限,为0.221 mg/kg;按10倍信噪比,计算其定量限,为0.738 mg/kg。
 
  3  结论
  本方法优化了高效液相色谱法检测乳制品中三聚氰胺测定方法,该方法简化了前处理步骤,易于操作,线性关系良好,有较好的精密度和重现性,回收率满足国家标准的要求,检出限和定量限也符合目前三聚氰胺的检测要求。
  相关资料:饲料中三聚氰胺液相色谱仪