一、 原理  本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测水产和鸡肉等组织样本中的己烯雌酚，在微孔条上预包被上偶联抗原，利用抗原与抗体的特异性免疫化学反应的原理来进行的，样本中的己烯雌酚和微孔条上预包被偶联抗原竞争抗己烯雌酚的抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样品中的己烯雌酚含量与样品的吸光度值呈反比，与标准曲线比较即可得出己烯雌酚含量。 二、 试剂盒技术指标：试剂盒灵敏度：          0.1ppb样本检测下限：组织（虾、鱼）           0.1ppb猪肉/肝 鸡肉/肝            2ppb饲料                      20ppb尿液                      0.6ppb回收率：饲料                      90±10%组织                      85±10%尿液                      80±10%交叉反应率：己烯雌酚                  100%双烯雌酚                  35%己烷雌酚                  10%己炔雌二醇                <0.1%雌三醇                    <0.1% 三、试剂盒组成1．酶标板：96T/8孔2．标准品液： 0ppb、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb（1.0mL/瓶）3．酶标记物            12mL4．抗体工作液          7mL5．底物缓冲液          7 mL6．底物液              7 mL7．终止液              7 mL8．20倍浓缩洗涤液     50 mL     用去离子水稀释到1000 mL9．20倍浓缩复溶液     12mL     用去离子水稀释到240 mL 四、样本前处理步骤样本处理前须知：1．实验中必须使用性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。2．实验之前须检查各种实验器具是否干净，必要时可对实验器具进行清洁，以避免污染干扰实验结果。样本前处理需配制：配液1：6M H₃PO₄   100mL   浓H₃PO₄（含量85%） 加去离子水150mL混合均匀配液2：1M NaOH    4g      NaOH     加去离子水100mL溶解配液3：2M NaOH    8g        NaOH   加去离子水100mL溶解配液4：乙腈-丙酮    80mL      乙腈    加入丙酮20mL混合均匀 样本的处理：（a）饲料样本1．称取2±0.05g捣粹后的饲料样本，加入8mL乙腈，振摇10min，15℃，3000g以上，离心10min；2．取2mL上清液，60℃氮气/空气吹干；3．加入0.5mL氯仿，涡动20s，加入2mL 1M NaOH，涡动30s，3000g以上，离心5min；4．取1mL上清液，加入100μL 6M H3PO4，涡动5s； 不同样本按如下方法稀释：配合料：取50μL，加入950μL的复溶液，涡动混匀，取50μL /孔用于检测。浓缩料/预混料：取25μL，加入975μL复溶液，涡动混匀，取50μL /孔用于检测。取50μL用于分析。配合料稀释倍数：100       浓缩料、预混料稀释倍数：200  （b）组织（鸡肉/肝、猪肉/肝、虾、鱼）1．称取2±0.05g匀浆后的样本，加入6mL乙腈-丙酮，振摇10min，15℃，3000g以上，离心10min。2．取3mL上清液，60℃氮气/空气吹干。加入0.5mL氯仿，涡动20s，加入2mL 2M NaOH，涡动30s，3000g以上，离心5min。3．取1mL上清液，加入200μL 6M H3PO4，涡动5s。4．加入3mL乙腈萃取，振荡10min，室温3000g以上，离心10min，取上层有机相， 60℃氮气/空气吹干。用1mL复溶液溶解干燥的残留物。 不同样本按如下方法稀释：虾鱼：直接取50μL水相用于检测。稀释倍数：2猪肉/肝、鸡肉/肝：取50μL水相加入450μL稀释后的复溶液，涡动均匀；取50μL用于检测。稀释倍数：20（c）尿液1．取2mL尿液到离心管中，室温3000g以上，离心10min，直至清亮；2．移取1mL清亮尿液至离心管中，加入1mL　1M NaOH强烈振荡5min；3．加入100μL  6M H3PO4，涡动30 s；4．再加入8mL氯仿进行萃取，振荡10min。15℃，3000g以上，离心10min；5．去掉上层的水相，取下层有机相4 mL，60℃氮气/空气吹干；6．用3mL稀释后的复溶液干燥的残留物；取50μL 用于分析。样本稀释倍数：6