使用步骤：   

1) 准备 ：首先将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的水 ，使水面与三角搁架相平为宜。一般来说每次灭菌前都应该加水。加水不能太少，否则会引起烧干或者爆裂。加水加去离子水或蒸馏水，这样产生的水垢少些，而且锅体不容易被腐蚀。  

2）放回灭菌桶，并装入待灭菌物品。将准备灭菌的培养基及空玻璃器皿用牛皮纸包好，装入锅内套层中，物品放置不宜过多，过挤，锅内应留出三分之一空间。以免防碍蒸汽流通而影响灭菌效果。三角烧瓶与试管口端均不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。  

3）加盖，并将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内。然后盖严锅盖，采用对角式均匀拧紧锅盖上的螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。  

4）用电炉或煤气加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升。当锅内压力升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间（在温度或者压力达到所需时，一般为121摄氏度，0.1MPa）需要切断电源），停止加热。当温度下降时，再开启电源开始加热，使温度维持在恒定的范围之内。因为温度太低达不到灭菌效果，太高可能会出危险。现在市场上手提灭菌锅实现了控制自动化，不过因为灭菌压力比较大，还是有人在现场比较保险）。  

5）灭菌所需时间到后，切断电源或关闭煤气，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至0时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，10分钟后取出灭菌物品。如果压力未降到0时，打开排气阀，就会因锅内压力突然下降，使容器内的液体由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成棉塞沾染培养基而发生污染。  

注意事项：  

1）每次使用前必须检查外桶内水量是否保持在灭菌桶搁脚处。   

2）设备工作时，当压力超过0.165Mpa时，安全阀不开启，应立即关闭电源，打开放气阀旋钮。  

3）降温时待温度自然降至60摄氏度以下再打开箱门取出物品，以免因温度过高而骤然降温导致玻璃器皿炸裂。  

4）灭菌物品不能堆得太满、太紧，以免影响温度均匀上升。严禁堵塞安全阀的出气孔，必须留有空间保证其畅通放气。  

5）压力表应定期检查，保证安全使用，若压力表指示不稳或不能恢复到0时，应及时检修或更换。      

6）橡胶密封圈易老化变形，如有发现应及时更换。发现螺丝，螺母松动应及时加固。     

7）定期扳动安全阀上的小扳手，检查阀心是否灵活，防止弹簧因生锈影响安全阀跳起。  

8）平时应将设备保持清洁和干燥，方可延长使用年限。