单B细胞克隆技术:优势、技术流程及应用

发布时间:2024/5/20 16:05:00

单克隆抗体(mAbs)作为医学领域中的“神奇子弹”,具有高度特异性,是诊断和治疗的重要工具。自1986年美国FDA批准首个用于肾移植排斥的抗CD3 mAb(Orthoclone OKT3)以来,已有超过100种单抗药物获得FDA批准。尤其在免疫肿瘤学领域,单抗及其衍生物(如抗体偶联药物ADCs、双特异性抗体、纳米抗体等)正成为领先的生物药物。

 

单B细胞技术的发展

传统的杂交瘤技术是首个用于分离单克隆抗体的技术,但其存在一些局限性,如培养时间长和通量低。为了克服这些问题,研究人员开发了多种新技术和方法。其中,单B细胞技术作为一项突破性进展,利用了B细胞的单一特异性,通过单细胞PCR技术从单个B细胞中直接获取抗体基因,随后在体外表达出单克隆抗体。这种方法显著缩短了抗体开发周期,并能够获得全人源化的单克隆抗体,从而增强了抗体的临床应用潜力。

 

单B细胞技术的优势

高效率:相比传统的杂交瘤技术,可以更快速地获得单克隆抗体,尤其在应对新型病原体时,可以迅速从免疫动物或康复患者体内分离出特异性B细胞。

高亲和力:保留了B细胞的天然VH和VL配对,抗体的亲和力高。

多样性:从多种不同的B细胞中获取广泛的抗体多样性,有助于发现新的治疗性抗体。

全人源性:能够获得全人源的单克隆抗体,降低抗体的免疫原性。

少量细胞需求:仅需单个B细胞即可进行抗体开发,降低了对细胞数量的依赖。

 

单B细胞技术的技术流程

单B细胞技术的开发流程包括动物免疫、单B细胞分离、抗体基因的扩增和克隆等5个环节,具体如下。

动物免疫:选择一种抗原来免疫小鼠或兔等动物,刺激其产生特异性抗体,并对效价进行检测。

单B细胞分离:通过各种方法如流式细胞分选(FACS)、微流控技术等从外周血或淋巴组织中分离出抗原特异性的单B细胞。

抗体基因的扩增和克隆:利用单细胞PCR技术扩增B细胞中的抗体基因,然后通过测序和分析选择有潜力的抗体基因。

重组抗体表达:将选定的抗体基因在哺乳动物细胞表达系统中表达,产生重组抗体。

抗体功能验证:利用ELISA、流式细胞术、BLI、SPR等各种生物学实验,验证重组抗体的特异性和生物活性。

 

单B细胞克隆技术作为一种新兴的抗体发现平台,因其独特的优势,在抗体药物开发领域展现出广泛的应用前景。随着技术的不断进步和优化,预期该技术将在未来的生物医药研究中扮演更加重要的角色。

 

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参考文献:

Pedrioli A, Oxenius A. Single B cell technologies for monoclonal antibody discovery. Trends Immunol. 2021;42(12):1143-1158. doi:10.1016/j.it.2021.10.008