在生物医学研究和治疗领域，单克隆抗体（mAbs）扮演着越来越重要的角色。特别是在癌症和慢性疾病的治疗中，抗体的亲和力——即其与目标抗原结合的紧密程度，直接影响抗体药物的治疗效果。因此，开发一种既准确又可靠的抗体亲和力测定方法，对于提高治疗效率和开发新型抗体药物至关重要。

传统的亲和力测定技术

目前存在多种测定抗体亲和力的方法，如放射免疫分析、表面等离子共振（SPR）、流式细胞术、酶联免疫吸附分析和动力学排阻分析等。作为一种成功的候选治疗药物，mAbs必须能识别目标抗原上的天然表位，因此需要一种更加快速灵敏、直观简便的测定方法。

基于细胞的荧光法：一种新的检测技术

Yu等人在杜克大学医学中心的研究中，开发了一种基于细胞的荧光检测法（如基于细胞的ELISA法），用于测定抗体亲和力。这种方法通过使用荧光标记的抗体，并将其加入到固定在96孔板上的抗原阳性和抗原阴性的细胞系中，通过计算特异性结合和非特异性结合的差值来测量抗体的亲和力。

研究者通过与传统的流式细胞术和放射性（I125）Scatchard分析方法进行比较，验证了基于细胞的荧光法的有效性。结果显示，新方法得到的解离常数KD值与传统方法相当，证明了这一新技术的准确性和可靠性。

此外，研究还展示了如何使用这种荧光法进行竞争性结合分析，进一步验证了抗体与抗原的特异性结合。这一功能对于研究抗体的结合表位和选择高亲和力抗体具有重要意义。

基于细胞的荧光法的优势

与流式细胞术和I125比色法等传统方法相比，基于细胞的荧光法具有多项优势。首先，该方法不使用放射性同位素，减少了实验的安全风险。其次，使用完整的细胞而非纯化的蛋白质，能够更真实地模拟抗体与天然抗原的相互作用。此外，该方法操作简便，成本低廉，适合高通量筛选，且能够在短时间内完成大量样本的分析。

尽管基于细胞的荧光法具有诸多优势，但也存在一些局限性。例如，对于复杂样品的处理可能会产生非特异性结合，导致结果的误判。然而，随着技术的不断优化和发展，这些问题有望得到解决。尽管目前还未有人利用基于细胞的荧光法来评估抗体亲和力，但是其自身具备的优势表明该方法具有作为抗体亲和力检测方法的潜力，为抗体药物的开发和研究提供强有力的支持。

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参考文献：

Yu X, Pegram CN, Bigner DD, Chandramohan V. Development and validation of a cell-based fluorescent method for measuring antibody affinity. J Immunol Methods. 2017;442:49-53. doi:10.1016/j.jim.2016.12.004