hrp标记抗体是什么意思?标记抗体有哪些方法?

发布时间:2024/1/10 15:10:00

辣根过氧化酶(HRP)是最常见的抗体酶标记类型。HRP上仅有6个赖氨酸,而且它们的修饰并没有较多的影响酶活性。常见的荧光染料有FITC、PE、APC和PerCP等,均可用于标记抗体。

 

HRP辣根过氧化物酶标记二抗通常用于如免疫印迹、酶联免疫吸附试验以及免疫组织化学等应用。无论在化学发光法中、在比色法中还是在荧光法中,HRP标记二抗需要结合高信噪比的底物。

 

除了为客户提供抗体开发,义翘神州还可以提供抗体标记服务,可提供的标记物包括HRP、生物素、荧光基团等。

 

常见的抗体标记方法

和所有蛋白质一样,抗体也是由氨基酸组成的。理论上,通过大多数氨基酸可以实现生物偶联。以下内容介绍了几种基于赖氨酸残基的抗体偶联和标记技术。

 

 

①NHS(琥珀酰亚胺)酯法

应用广泛的荧光染料(如罗丹明衍生物)是采用这种方法对抗体进行偶联。通常在磷酸盐缓冲液中进行,随后与未标记的染料在柱上进行分离。该方法的主要缺点是,由于酯类对水分敏感,酯类的稳定性差。因此,反应结束后,标记抗体应立即使用。

 

吉妥珠单抗(Gemtuzumab ozogamicin, Mylotarg?)是全球范围内首个获批上市的抗体偶联药物(ADC)。半合成的卡奇霉素衍生物具有NHS酯,以便将卡奇霉素与人源化IgG4的赖氨酸残基偶联。然而,由于患者的临床获益不足,Mylotarg?已于2010年退市。

 

 

②异硫氰酸盐法

这种方法主要用于异硫氰酸荧光素(FITC)染料的偶联,广泛用于荧光标记蛋白和抗体的制备。异硫氰酸盐比NHS更稳定,但也更难制备,而且利用该方法,标记的反应效率可能会降低。与NHS法一样,应在反应结束后通过层析法去除多余染料。

 

 

③碳二亚胺法

碳二亚胺衍生化合物将蛋白质上的羧基转换为反应中间体,可与赖氨酸发生反应。碳二亚胺的高反应性意味着它们可用于使用相对惰性的材料(如磁性或金颗粒)标记抗体。最常用的碳二亚胺为EDC。NHS有时可被添加至反应中,以辅助产生相对稳定的中间体。

 

该方法操作简单,但与NHS一样,EDS具有吸水性,因此,标记后抗体需立即使用。

 

 

④高碘酸盐法

这种方法可用于制备特异性的HRP标记抗体。高碘酸盐通过产生与赖氨酸残基相互作用的醛分子来激活HRP。HRP本身只有少量的赖氨酸残基,因此酶聚合的影响不大。HRP和抗体之间的键是可逆的,可通过添加氰基硼氢化钠使其保持稳定。

 

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