义翘神州单克隆抗体纯化：

单克隆抗体（mAb）的纯化包括了从腹腔积液或杂交瘤细胞系的细胞培养上清液中分离抗体。纯化单克隆抗体时，单体纯度和内毒素水平是两个重要的因素。

单体纯度

单体纯度是单克隆抗体候选治疗药物在临床前体内研究中的一个关键参数，因为聚集物可以影响抗体的生物活性和免疫原性以及药代动力学。因此，在体内研究中，抗体的单体纯度通常需要控制在95%以上，在高剂量研究中，需要将单体纯度提高至99%。

通过精细纯化步骤（例如离子交换色谱法、疏水色谱法和尺寸排阻色谱法）清除抗体聚集物和片段，可提高单体纯度。对于在某种缓冲剂中容易形成新型聚集物的抗体而言，精细纯化步骤不足以提高单体纯度，因为在纯化过程中会有新型聚集物形成。在这种情况下，需要优化可以防止新型聚集物形成的制剂缓冲液。

内毒素水平

内毒素是一类由脂类和多糖构成的大分子物质。这种多糖由通过共价键连接的O型抗原、外核和内核组成。内毒素来源于革兰阴性菌的外膜。内毒素可在动物和人类中引起强烈的免疫反应，因此，限制注射用蛋白质和抗体产品中的内毒素污染物的数量是很重要的。

在临床前动物研究的单克隆抗体制备中，通常需要控制最终产品的内毒素水平，避免任何由内毒素造成的尺寸效应。内毒素通常通过用于转染的原材料、培养基、容器和质粒导入至培养系统中。因为DNA质粒是通过大肠杆菌发酵作用而生成的，因此通常包含高水平的内毒素。因此，控制原材料和细胞培养基的质量十分重要，从用于转染的DNA质粒中清除内毒素也同样重要。蛋白A亲和纯化后，内毒素水平仍然高于可接受水平，因此通常需要利用抛光色谱步骤从抗体产品中分离和去除内毒素。

义翘神州已经在多种动物研究中制备了数百种低内毒素的单克隆抗体，用以满足全球客户的需求。我们低内毒素的抗体制备服务可以满足适用于人类使用的抗体质量。特别是，如有需要，内毒素水平可以降低至0.01-0.05EU/mg。

义翘神州多克隆抗体纯化：

多克隆抗体一般通过Protein A或Protein G的方法从动物血清中纯化抗体。但某些使用场景对抗体的质量要求很高，需要利用抗原亲和层析从总IgG抗体中进一步纯化和分离抗原特异性抗体，最终获得纯度高、非特异性背景低的多克隆抗体。

义翘神州已积累了数千个多克隆抗体的纯化经验，可向客户提供值得信赖的定制多克隆抗体制备服务，所生产的多克隆抗体可用于ELISA、WB、IHC等实验。具体详情，欢迎随时咨询我们。

多克隆抗体纯化的常用方法

抗血清是一个非常复杂的混合物，包括血清的全部成分。抗血清被收集后，可通过硫酸铵沉淀法对其进行初步纯化，移除许多粘性蛋白，尽可能减少这些杂质对后续亲和层析纯化的影响。不同的纯化方法经常联合使用，用于从血清中纯化高质量的多克隆抗体。查看更多有关“抗体纯化方法”的信息。

①Protein A/G纯化

Protein A、Protein G和Protein L是三种细菌蛋白，具有能与抗体高效结合的特性。这些蛋白经过基因工程技术重组表达，常用于不同物种关键抗体类型的亲和纯化。

Protein A/G纯化是一种快速高效的多克隆抗体纯化方法，其原理是能与不同物种的IgG恒定区发生结合，从而除去血清蛋白和IgM抗体。应该注意的是，终产品包含总IgG抗体和特异性抗体。

义翘神州已生产了Protein A和Protein G琼脂糖纯化树脂，可用于纯化小鼠IgG2a/2b/3、大鼠IgG2c、人IgG1/2/4和兔IgG等多种来源的抗体。

②抗原亲和纯化

在Protein A/G纯化步骤后，抗原亲和纯化可进一步用于制备具有特异性高和纯度高的多克隆抗体。这种高灵敏度和高特异性的多克隆抗体适合用于IHC和IF等免疫学检测实验，即使在较低的稀释比下使用，也不会增加信号背景。

抗原亲和纯化，首先将抗原固定至树脂上，然后目的抗体与抗原发生特异性结合，最后洗脱得到目的抗体，以达到纯化多克隆抗体的目的。与Protein A法相比，此方法识别的是抗体的可变区，能高度识别和结合目的抗体，常用于多克隆抗体的纯化。