昆虫细胞表达系统优点有哪些?义翘昆虫细胞蛋白表达服务介绍

发布时间:2023/7/7 16:01:00

昆虫细胞表达系统是四大表达系统(昆虫细胞、细菌、酵母、哺乳动物细胞表达系统)之一。昆虫细胞表达系统原理是通过转座作用将转移载体中的表达组件定点转座到能在大肠杆菌中增殖的杆状病毒穿梭载体(Bacmid)上,通过抗性和蓝白斑筛选到重组穿梭质粒,提取穿梭质粒DNA转染昆虫细胞后,得到的子代病毒即为重组病毒。将病毒上清浸染昆虫细胞,获得表达的重组蛋白。

 

杆状病毒是一类闭合环状双链病毒,病毒粒子呈杆状,以昆虫为主要宿主。

昆虫细胞表达系统优点:

①具有糖基化作用、乙酰化作用、磷酸化作用等一系列蛋白质翻译加工修饰系统;

②正确的蛋白折叠、二硫键形成,使重组蛋白在结构和功能上更接近天然蛋白,有利于表达产物形成天然的高级结构;

③具有对重组蛋白进行定位的功能,如将核蛋白转送到细胞核上,膜蛋白则定位在膜上,分泌蛋白则可分泌到细胞外等;

④昆虫细胞悬浮生长,容易放大培养,有利于大规模表达重组蛋白。高表达量,最高表达量可达昆虫细胞蛋白总量的50%;

⑤可表达非常大的外源性基因(~200kD)而不至于影响本身的增殖;

⑥具有在同一个感染昆虫细胞内同时表达多个基因的能力;

⑦通用性广,能用于表达来自病毒、细菌、真菌、植物和动物几乎所有的蛋白,并且能表达带有内含子的外源基因;

⑧对脊椎动物是安全的,杆状病毒属于昆虫病毒,有高度特异的宿主范围,对脊椎动物和植物均无致病性,而且经重组后的病毒因失去多角体保护而使其在自然界的生存能力很弱,被认为是安全的载体。

 

义翘神州提供杆状病毒-昆虫蛋白表达的一站式服务。杆状病毒-昆虫细胞表达系统具有经济、易于放大培养和高表达水平等优势,是应用较广泛的真核表达系统之一。其翻译后修饰类似于哺乳动物细胞,适用于表达一些可能对哺乳动物宿主细胞产生负作用的蛋白,如激酶以及毒性蛋白等。凭借优化的表达载体和更高滴度的病毒包装技术,义翘神州在杆状病毒-昆虫细胞蛋白表达方面具有丰富的经验,特别是针对序列较长的蛋白、病毒类蛋白、激酶、胞内蛋白以及膜蛋白等。

 

昆虫细胞蛋白表达服务内容:

 

①基因合成及密码子优化(1-2 周)

 

客户提供目的蛋白的序列信息或质粒。

②载体构建(1-2 周)

 

克隆至表达载体

质粒测序

质粒制备

 

交付内容

测序报告 (若客户要求)

 

③病毒包装及扩增(2-3 周)

病毒包装

病毒扩增

 

④蛋白表达和纯化(2-3 周)

病毒侵染细胞

小量表达、纯化及条件优化

QC分析 (SDS-PAGE, UV等)

 

交付内容

0.1-0.5mg纯化蛋白样品 (如蛋白表达可行)

质量检验报告 (CoA)

 

⑤大量表达及纯化(3-5 周)

 

100mg或更多蛋白

QC检测

 

交付内容

纯化蛋白

质量检验报告 (CoA)

 

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