生物素标记蛋白原理——义翘神州Avi-Tag+化学标记

发布时间:2023/6/9 17:25:00

生物素-亲和素系统 (biotin-avidin system,BAS),是70年代后期应用于免疫学,并得到迅速发展的一种常用的生物反应放大系统。它具有高度特异性、敏感性、稳定性的特点,两者的亲和常数(K=1015 mol/L)比抗原-抗体(K=105~1011 mol/L)至少高1万倍,是目前已知强度最高的非共价作用,这使得生物素标记的蛋白成为研究蛋白质相互作用和筛选抗体或小分子潜力药物的强大工具。

 

义翘神州开发了丰富的生物素标记蛋白产品,拥有Avi-tag定点标记和化学标记两种类型的生物素标记蛋白,覆盖细胞治疗、抗体药、疫苗等热门靶点。产品具有高批间一致性、高活性等优势,适用于ELISA、Biopanning、SPR / BLI等实验。

 

 

生物素标记蛋白原理:

 

生物素标记蛋白是将生物素作为抗体的标记物,将其与抗原结合,以改善抗体-抗原结合的效果。生物素是一种无机物,它具有独特的结构,可以结合抗原,从而增强抗体-抗原结合的效果。此外,生物素还具有良好的稳定性和通用性,可以用于合种类型的实验。

 

义翘神州——Avi-Tag生物素标记蛋白

 

 

Avi-tag重组蛋白融合一个额外的15个氨基酸序列,即Avi-tag,通常连接至蛋白的N-或C-末端。 Avi-tag肽段被大肠杆菌生物素连接酶BirA所识别,BirA连接酶通过酶促反应将生物素连接到Avi-tag序列内的单个赖氨酸残基。因此,Avi标签蛋白以特定位点的方式进行生物素化,从而实现标记均一。 这使固定在亲和素包被表面的蛋白方向具有一致性,并且由于Avi标签位于蛋白的末端,因此对蛋白活性的影响通常很小,有助于保持生物素化的蛋白与未标记的蛋白保持相同的特性。

 

生物素与链霉亲和素/亲和素(SA)之间的强非共价相互作用,具有高灵敏度和高特异性。义翘神州开发了多种Avi-tag生物素标记的重组蛋白。

 

产品优势:

? 高生物活性,经ELISA、SPR、BLI等验证

? 多种属,覆盖细胞治疗、抗体、Fc受体等热门靶点

? 高批间一致性

 

义翘神州——化学标记生物素蛋白

 

化学标记法,是将蛋白N-末端游离胺基及内部的赖氨酸侧链上的胺基与生物素分子结合,通常一个蛋白质分子会被标记上多个生物素分子。化学标记法具有灵敏度高、tag free等特点,是常用的生物学方法之一。

 

产品优势:

? 高信号强度,每个蛋白分子通常平均含有多个生物素,有助于对其检测。

? 标记方法简单,检测灵敏度高。

? 高生物活性,ELISA、SPR等验证,批间一致性高

 

 

生物素标记蛋白有哪些应用?

生物素标记蛋白广泛的应用在生物技术的众多领域。如透析,将具有特殊结构的亲和分子制成固相吸附剂放置在层析柱中,当要被分离的蛋白混合液通过层析柱时,与吸附剂具有亲和能力的蛋白质就会被吸附而滞留在层析柱中。那些没有亲和力的蛋白质由于不被吸附,直接流出,从而与被分离的蛋白质分开,然后选用适当的洗脱液, 改变结合条件将被结合的蛋白质洗脱下来。怎么释放所需蛋白呢?这需要非常严苛的条件(例如,pH=1.5的 GuHCl),这种极端条件下的蛋白是会变性的。如果需要分离标记的蛋白质,最好用亚氨基生物素标记的蛋白质。该种生物素在碱性条件下与抗生物素蛋白结合紧密,但是在降低pH以后,亲和力降低。因此亚氨基生物素标记蛋白可以通过降低pH(约pH=4)从柱子上释放。

 

免疫检测中的应用:在常规ELISA原理的基础上,结合生物素(B)与亲和素(A)间的高度放大作用,而建立的一种检测系统。生物素很易与蛋白质(如抗体等)以共价键结合。这样,结合了酶的亲和素分子与结合有特异性抗体的生物素分子产生反应,既起到了多级放大作用,又由于酶在遇到相应底物时的催化作用而呈色,达到检测未知抗原(或抗体)分子的目的。 这可以用于通过荧光或电子显微镜定位的ELISA测定,ELISPOT测定,western印迹和其他免疫分析方法。