什么是流式细胞术？

流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）是在流式细胞仪的基础上，对处于快速直线流动状态的单列细胞或生物颗粒进行逐个、多参数、快速定性、定量分析的一种高新技术，具有高通量、多参数、速度快，采集数据量大、操作灵活等优点。最开始检测单细胞内DNA、RNA含量，蛋白质或线粒体等大分子结构和细胞动力学，到如今拓展到细胞表面标志及抗原决定簇的研究、细胞抗原表达、免疫功能测定、细胞分选和鉴定、基因表达蛋白检测、细胞内细胞因子鉴定等多个研究领域，在市场上应用极为广泛。

流式细胞术原理

利用流式细胞术快速精确的对单个细胞的理化性质进行定量分析和分选，主要通过几个步骤：制备单细胞悬液，用特异性荧光染料标记的抗体进行染色，经染色后的待测细胞在一定气体压力下被压入流动室，在鞘液的包裹下细胞呈单行排列，依次通过检测区域，在激光束的照射下细胞会产生散射光和激发荧光。这两种信号会同时被光电倍增管( PMT) 接收。接收后可转换为电信号，通过模/数转换器，将连续的电信号转换为可被计算机识别的数字信号，进行分析。

常见问题及分析：

1. 细胞无染色或弱染色

细胞自发荧光较高：改变抗体的荧光染料形式。避开与自发荧光相同发射光的染料；

荧光染料淬灭：荧光抗体和荧光抗体染色后的样本都应该避光保存；

激光器性能异常：使用流式细胞仪设定&跟踪微球，以检查激光的校准和功能；

数据过度补偿：利用单染色对照和荧光减一对照为每次实验设定补偿；

2. 高背景或存在非特异性染色

二抗/试剂存在非特异性结合：滴定二抗，使本底降至最低程度，阻断Fc受体，确保使用已经被高度认可无非特异性的二抗；

抗体浓度过高：更改抗体的用量；

染色时间太长：根据实验细胞表达，优化抗体浓度和孵育时间；

洗涤不充分：增加染色后的洗涤次数；

3. 染色异常情况

使用同型对照浓度不对：使用与检测抗体浓度相同的同型对照；

使用同型对照来自不同的厂家：使用与实验抗体同一厂家生产的同型对照；

固定/破膜液影响细胞固定：调整FSC/SSC电压，使细胞处于可视范围之内。

义翘神州提供流式细胞检测技术服务，服务优势：

?  具有 20,000 次以上流式抗体筛选鉴定经验及多年流式诊断抗体研发经验，在实验方案设计、样品制备、数据分析等方面确保科学性、准确性和可靠性;

? 拥有 1,000 余株自产精品流式抗体，覆盖细胞膜、胞内、核内及分泌抗原；

? 自产 Annexin V/7-AAD 凋亡检测试剂盒，并储备多种流式检测常用试剂，大大节约购买试剂的等待时间和实际费用；

? 可以提供近 200 种细胞系选择，省去细胞样本寄送过程中的风险，并可以免费提供健康人外周血细胞对照品。

流式细胞检测服务内容：

①细胞表型检测（2-4个工作日 ）

 (T/B/NK/Treg免疫分型分析等)

处理样本类型: 组织、外周血、细胞系

②CBA细胞因子检测（2-4个工作日 ）

处理样本类型: 血清、细胞培养上清、组织蛋白

③细胞活性检测（2-4个工作日 ）

处理样本类型: 细胞系、外周血、组织细胞

④细胞凋亡检测（2-4个工作日 ）

处理样本类型: 细胞系、外周血、组织细胞

⑤细胞增殖检测（2-4个工作日 ）

处理样本类型: 细胞系、外周血、组织细胞

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