抗体纯化方法概述

抗体纯化用于从血清中分离多克隆抗体，或从腹水或培养上清液中分离单克隆抗体。我们可以采用多种方法纯化抗体，可纯化从粗制到具有高度特异性的抗体。

利用制备好的抗原使动物产生免疫反应，随后生成结合这种抗原的特异性抗体。从血清或杂交瘤细胞系（从免疫动物组织中制备）中纯化的抗体可直接用于（或在用酶或荧光标记物标记后）蛋白免疫印迹、ELISA等抗原检测及多种其他应用。单克隆抗体纯化工艺通常涉及捕获、中间纯化和精纯等两步或三步纯化方法。

抗体纯化方法：

①抗体捕获方法

因为抗体具有可预测的结构，包括相对不变的结构域，不管抗体对抗原的特异性如何，都有可能识别出某些能与抗体结合的蛋白配体。蛋白A、蛋白G和蛋白L是三种细菌蛋白，具有良好的抗体结合特性。这些蛋白通过重组制备，通常用于多物种的关键抗体类型的亲和纯化。这些抗体结合蛋白可固定在串珠状琼脂糖树脂上。

②抗体精纯方法

利用亲和层析法的单个快速捕获步骤足以达到研究目的所需产品的纯度和产品数量。抗体或其片段可以充分纯化以供进一步使用，且精纯步骤足以去除多余杂质。如果不能使用亲和层析法达到需要的更高纯度，则应在精纯方法中使用其他替代技术。如表2所示，我们对天然或重组抗体或片段有大量可用信息，可以选择合适的精纯方法。

蛋白纯化概述

重组蛋白的纯化是生物学研究中的重要技术。为了研究蛋白的特定功能和结构，研究人员必须将重组蛋白从生物体中分离并纯化。蛋白纯化方法主要利用不同重组蛋白之间的相似性和差异性。可以根据蛋白之间的相似性去除非蛋白物质，然后根据蛋白之间的差异分离纯化目标重组蛋白。

蛋白纯化的原理

不同的重组蛋白具有不同的氨基酸序列和空间结构，导致其物理、化学和生物学特性存在差异。我们也可以根据目标蛋白与其他蛋白和裂解液的性质差异设计合理的蛋白纯化方案。

大多数的纯化方案需要不止一步才能达到理想的纯度水平。该过程中的每一步都会造成一定的产品损失，假设每一步的获得率为80%。因此，建议尽可能减少纯化步骤。起始原料的选择是纯化过程设计的关键。

在背景信息、检测方法和样品规格都已到位的情况下，可以考虑采用三阶段纯化策略。纯化分为捕获、中度纯化和精细纯化三个阶段，每个阶段都有特定的目标。捕获阶段的目标是分离、浓缩和稳定目标产物。

蛋白纯化方法：

（1） 根据分子大小不同的分离方法：透析和超过滤（利用蛋白质分子不能通过半透膜的性质）；密度梯度离心（蛋白质在介质中离心时质量和密度较大的颗粒沉降较快）；凝胶过滤(一种柱层析)

（2） 利用溶解度差别分离：（等电点沉淀法）由于蛋白质分子在等电点时净电荷为零，减少了分子间静电斥力，因而容易聚集沉淀，此时溶解度最小)；盐溶与盐析(利用一定浓度盐溶液增大或减小蛋白质的溶解度)

（3） 根据电荷不同的分离方法，主要包括电泳和离子交换层析分离；

（4） 蛋白质的选择吸附分离（利用颗粒吸附力的强弱不同达到分离目的）

（5） 根据配体特性的分离——亲和层析（利用蛋白质分子与另一种称为配体的分子能够特异而非共价地结合这一生物性质）

 (6)  低温有机溶剂沉淀法: 用与水可混溶的有机溶剂，甲醇，乙醇或丙酮，可使多数蛋白质溶解度降低并析出，此法分辨力比盐析高，但蛋白质较易变性，应在低温下进行。

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