酶联免疫吸附测定（ELISA）又称酶免疫测定（EIA），是一种广泛应用于免疫学检测领域的生化技术。该技术的主要原理是利用抗体或抗原与酶的结合，将免疫反应转化为可定量测定的信号。在ELISA实验中，通常将含有未知量的抗原固定在固相载体上，如微孔板。然后，加入特异性抗体与抗原孵育，使抗体与抗原结合。最后，加入酶标记的二抗，与特异性抗体结合。通过酶促反应，将无色的底物转化为有色的产物，从而实现对抗原的检测。根据实验设计及目的不同，ELISA可分为间接ELISA、直接ELISA、夹心ELISA和竞争ELISA等不同类型。下面将分别介绍它们的原理及常见问题：

间接ELISA原理：

间接ELISA的原理是基于抗原和抗体的特异性结合。在间接ELISA中，首先将待测物质（通常为抗原）固定在固相载体（如微孔板）上，形成抗原固定化的固相。然后，加入一定浓度的非特异性抗体，使其与固相上的抗原结合。接下来，加入特异性抗体，它与非特异性抗体结合在一起，形成抗原-非特异性抗体-特异性抗体复合物。最后，通过酶标记的二抗或酶标记的蛋白A/G结合到特异性抗体上，通过酶促反应产生荧光、发光或颜色变化等信号，从而检测抗原的存在和浓度。

直接ELISA原理：

直接ELISA的原理是将酶标记的抗体或抗原直接与待测物结合，形成夹心复合物，然后加入底物检测酶的活性。

具体来说，直接ELISA方法是将酶标记的抗体或抗原直接固定在固相载体（如微孔板）上，然后加入待测样本，使其与固定化的抗体或抗原结合。随后加入底物，通过酶促反应产生荧光、发光或颜色变化等信号，从而检测待测物的存在和浓度。

直接ELISA方法的优点是操作简单，但灵敏度较低，适用于检测浓度较高的待测物。同时，该方法也受到固相载体、抗体或抗原的性质和质量的影响，因此需要选择合适的试剂和实验条件。

夹心ELISA原理：

夹心ELISA的原理是将特异性抗体包被于固相载体上，加入待测抗原，使其与固相上的抗体结合，形成固相抗原-抗体复合物。然后加入酶标记的二抗，使其与固相抗原-抗体复合物中的抗体特异性结合，形成固相抗原-抗体-酶标抗体复合物。最后加入底物显色，通过观察颜色变化和显色深浅，判断待测抗原的存在与否和浓度高低。

夹心ELISA方法的优点是灵敏度高、特异性好、操作简便、易于自动化等。由于使用了固相载体，可以将待测抗原和游离的未结合的抗原分离，从而提高了检测的准确性和可靠性。此外，夹心ELISA还可以用于检测小分子和大分子抗原，应用范围广泛。

竞争ELISA原理：

竞争ELISA的原理是利用酶标记技术，通过酶与酶底物反应的颜色变化来检测样品中特定物质的含量。竞争ELISA的基本步骤包括涂膜、孵育、洗涤、加底物和反应终止。在ELISA板的孔中涂覆含有特定抗原的抗体，使其与孔壁结合。然后，加入待测样品和酶标记抗体，使其与孔中的抗原结合。在孵育过程中，待测样品中的目标物质与酶标记抗体竞争与抗原结合，形成抗原-酶标记抗体-目标物质复合物。经过洗涤步骤，将不与抗原结合的物质洗去，以减少干扰。接下来，加入底物，酶与底物反应产生颜色变化。最后，通过加入反应终止剂停止酶反应，将颜色的强度与目标物质的含量相关联。

ELISA常见问题解析：

ELISA的优势是什么？

与其他免疫分析方法相比，ELISA有很多优点：ELISA检测更为准确，且具有高灵敏度和特异性；与其他用于体内检测物质的方法（如放射免疫测定，RIA）相比，具有更明显的优势。此外，ELISA还具有如无需放射性同位素（放射性物质）或昂贵的辐射计数器（辐射计数装置）等其他优势。

如何保存义翘神州的ELISA抗体？

分析说明书上列出了具体的保存建议。我们建议将所有抗体进行分装后保存在-20°C或以下，避免多次冻融，以免影响抗体活性。如果抗体未按说明书规定存储，我们将无法确保其性能。

义翘神州ELISA抗体的保质期是多久？

除非说明书中另有说明，我们的大多数抗体产品可以在2℃-8℃下保存1个月，而不影响检测活性；在-20℃-70℃条件下保存时，从签收日期算起，抗体可以稳定存放12个月（注：应避免反复冻融）。

义翘神州的ELISA抗体是如何供应的？

义翘神州的所有ELISA抗体均以液体形式提供。在环境温度下，产品在运输过程中保持稳定。我们在-20°C、室温以及37°C温度条件下，对每种抗体的稳定性和活性进行了测试，持续时间超过7天。在这三种条件下，抗体都具有同样的活性和稳定性。

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