抗独特型抗体开发的常见问题解答

一、如何有效筛选出非竞争型抗体？

首先，在血清效价检测中，使用竞争ELISA的方法对不同动物血清中的免疫反应进行评估，选择竞争抑制率相对低一些的动物进行杂交瘤融合。接下来，在主克隆、亚克隆等筛选的不同阶段，使用竞争ELISA的方法对杂交瘤上清进行竞争分型检测，有目的性地保留自己需要的抗体类型。

二、抗独特型抗体的主要应用有哪些？

抗独特型抗体目前主要用于抗体类药物的血药浓度监测和抗药抗体检测。除此之外，抗独特型抗体也可以作为抗原的“内影像”，用于疫苗开发，在一些自身免疫性疾病、肿瘤、感染性疾病的预防中发挥重要作用。

随着生物技术的飞速发展，多种生物药物如单抗、双抗、ADC和CAR-T治疗等在疾病治疗中发挥了巨大的作用。义翘神州可针对这些生物药类型开发PK和免疫原性分析的关键工具试剂，并根据下游的检测需求为客户量身定制抗独特型抗体开发方案。

三、抗独特型多克隆抗体和单克隆抗体该如何选择？

抗独特型单克隆抗体主要用于检测抗体类药物的血药浓度水平，在抗体药的PK和PD检测广泛使用，另外，也可以用在免疫原性（ADA）评价中。抗独特型多抗直接由抗血清纯化获得，能够更好地模拟受试者血样中的真实情况，所以考虑到受试者血样中抗药抗体类型的多样性，抗独特型多抗主要用于抗体类药物的免疫原性评价。

义翘神州已成功完成了100多个抗独特型单抗和多抗开发项目，成功率>95%，并制备了大量高亲和力、高特异性的抗独特型抗体，充分地满足客户的PK/ADA检测需求。

四、抗独特型抗体制备的免疫原怎样选择？

抗独特型抗体的免疫原既可以选择全长抗体药也可以选酶切后的F(ab’)2片段，二者各有优缺点。全长抗体药因为Fc段的存在，更容易与人总IgG和同型IgG产生交叉反应，进而增加了抗独特型抗体的筛选背景和筛选难度；但全长抗体药，没有经历酶切的过程，所以免疫原制备成本相对较低，同时全长抗体结构没有经过干预，所产生的抗体与原抗体药识别并结合的概率更高。实际工作中，大家需要根据具体的实验需求，选择更有优势的免疫原。

五、抗独特型多抗的质控要求是什么？

抗独特型多抗通常用于抗体类药物的ADA检测中。所以，除常规的抗体纯度、浓度检测外，考虑到这一类型抗体的应用场景，应该尽量降低抗独特型多抗与人IgG的交叉反应。义翘神州通过优化纯化方法，目前可以将交叉反应率控制2%以下，绝大多数情况可以实现与人IgG的零交叉反应。另外，依据2019版FDA《免疫原性评估指导原则》，ADA检测方法的灵敏度需要达到100 ng/mL，这与多克隆抗体的检测亲和力密切相关。

六、快速免疫和常规免疫相比，区别在哪里？

常规免疫的操作相对固定，比如小鼠免疫，多采用10-50 μg/只/次的免疫剂量，间隔2-3周，免疫3-4次，然后进行血清效价检测。快速免疫在免疫间隔、剂量和佐剂上都不同于常规免疫。义翘神州已建立了快速免疫技术平台，可以向客户提供快速抗体制备的外包服务，您可以通过以下3种方式直接联系我们。

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七、是否可以构建表达一个CDR序列多肽作为抗原免疫？这样做有什么弊端？

不建议用这种方法制备抗独特型抗体。作为与靶标蛋白结合的功能区，抗体类药物的独特型不仅与序列有关，也和整个抗体的结构都有密切的关系。如果单独用CDR区的肽段免疫，存在所得的抗体与目标抗体药不结合的风险。

八、双抗的抗独特型抗体怎么制备？

针对双抗，抗独特型多抗可以通过直接免疫并纯化获得。抗独特型单抗则需要针对两个不同的靶点进行竞争筛选方法，从而获得分别识别不同靶标表位的竞争型和非竞争型抗体。

义翘神州在抗独特型抗体开发方面拥有丰富的经验，已成功完成了多个靶向双特异性抗体的抗独特型抗体研发项目，交付的产品获得了客户的一致好评。

九、ADA试剂盒中抗体药物包被浓度为什么高了，灵敏度反而会降低？

ADA试剂盒的检测原理是利用抗体结合的二价性，即被检抗体能同时结合两个抗体药的特性。基本流程为：首先包被抗体类药物，然后加入待检抗药抗体样本，最后再加入标记后的抗体药进行显色。如果提高包被用抗体药物浓度，使其相对于待检的抗药抗体过量，那么抗药抗体的两个抗原结合位点都将与包被的抗体药结合，从而没有空余的表位与标记后的抗体药结合，最终表现为整个检测体系的灵敏度降低，所以在ADA检测的试剂盒中包被的抗体药物的量需要有浓度限制。

为加速药物研发的进程，义翘神州可提供从抗原制备、单克隆抗独特型抗体开发、多克隆抗独特型抗体开发到PK/ADA试剂盒定制的一站式服务。

十、抗独特型抗体是在抗体血药浓度测定时必须用到的吗？目前有没有其他的替代办法？

抗独特型抗体的配对检测是抗体类药物血药浓度检测的常用方法之一，但并不是唯一的方法。除使用抗独特型抗体的检测方法之外，还可以选择其他类型的配体结合试验（Ligand Binding Assays, LBAs）来进行血药浓度的检测，比如：

1）抗原捕获抗体检测（抗原捕获实验）：包被靶标蛋白捕获抗体药，加入标记二抗显色。

2）抗原捕获抗原检测（桥联实验）：包被靶标蛋白捕获抗体药，再加入标记后的靶标蛋白进行竞争，通过竞争值高低进行血药浓度的计算。

3）抗种属抗体捕获&检测（通用实验）：包被抗种属抗体（如抗人Fc）捕获抗体药，然后加入标记后的另外一种抗种属抗体（如抗人Fab ）检测。

4）竞争实验：包被靶标蛋白或种属抗体，加入标记和未标记的抗体药与捕获物进行竞争检测。

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