elisa试剂盒的选购与评价
发布时间:2015/1/27 13:29:00应用于科研的试剂盒,国家则没有出台相关的质量管理规定,因此试剂盒质量也就无法保障。在这种情况下,许多劣质的试剂盒在市面泛滥,不少同行战友为此浪费了大量的时间和金钱,却没有得到一个良好的实验结果。下面给战友们介绍一下如何判断试剂盒的质量,选购好的试剂盒。
仔细阅读说明书,对说明书的内容有一个详细的了解。
审查内容包括:
1、试剂盒的名称:ELISA试剂盒名称一般由“(物种)+(测定指标)+酶联免疫试剂盒(ELISA)”,物种和测定指标不能搞错,否则买错了就是你的事情;另外有的试剂盒说明书试剂盒名称明显与写在试剂盒上的名称不符,这要引起你的警惕。
2、测定原理:现在ELISA试剂盒除非是测定抗体的以外,一般使用的是双抗体夹心法,此种方法大多数用的是增强的双抗体夹心法,即使用生物素-亲和素系统, 还有少数的指标可能使用竞争法,这类方法适用于半抗原的测定。具有复杂结构的多表位蛋白抗原,其双抗体夹心法中的一个抗体必须用单抗,否则背景很高。当然 如果两个都是单抗(这两个单抗针对不同表位),那么测定的线性范围就较宽,试剂盒性能就较好;一个用单抗,一个用多抗,测定的灵敏度会较高。某些简单的化 合物用ELISA测定时,因为没有两个或以上的表位,一般只能作为半抗原,只能用竞争法测定。如果你发现有测定简单化合物(如雌激素、NO、地高辛等)用 双抗体夹心法作测定原理时,这个试剂盒你就要怀疑了。另外还要说明一步双抗体夹心法与两步双抗体夹心法的区别。
一步双抗体夹心法的吸光度-剂量曲线呈钟形,随着待则标本中抗原浓度的增加而升高至一定程度后,测定吸光度即随抗原浓度的增加而开始下降直至不显色,即所 谓的“钩状效应”(hook eHect),也就是我们在免疫沉淀试验中所称的“带现象”(zone phenomenon)。所以当使用一步双抗体夹心法时,样品浓度太高,有时会出现测不出来的现象,此时要作适当的稀释才能准确测定。
3、试剂盒的组成:用双抗体夹心法作为测定的方法时,试剂盒的组成一般包括:
已包被单抗的酶标板:一块,有96孔的,也有48孔的,可拆缷,外面有铝箔袋密封,打开后有干燥剂,实验时暂未使用的酶标条要连带干燥剂密封好,放在4℃冰箱中妥善保存。