产品特点：

本产品为在SDS-PAGE凝胶或蛋白免疫印记硝酸纤维素膜上检测糖蛋白的试剂盒。该方法使用三种试剂，所需时间仅需不到两小时，而其他的染色方法需要四到五小时。染色后的糖蛋白为品红色条带，背景为浅粉色或者无色。它有如下特点：

1. 包括一种阳性对照蛋白及一种阴性对照蛋白。

2. 简洁、易储存的试剂盒。

3. 本产品足够10张mini-PAGE胶或20张8X8cm蛋白免疫印记硝酸纤维素膜染色。

常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：

实验前准备

1. 配制3%乙酸溶液：将30 mL冰醋酸与970 mL超纯水混匀，室温保存备用。

2. 配制50%甲醇溶液：将250 mL甲醇与250 mL超纯水混匀，室温保存备用。

3. 配制氧化试剂：向氧化试剂干粉中加入250 mL的3%乙酸溶液，充分混匀溶解后得到氧化试剂溶液，室温保存备用。

4. 配制还原试剂：向还原试剂干粉中加入250 mL的超纯水，充分混匀溶解后得到还原试剂溶液，室温保存备用。

5. 配制阳性对照（辣根过氧化物酶）：向1 mg固体中加入0.5 mL超纯水，使得溶液浓度为2 mg/mL。用SDS-PAGE上样缓冲液将溶液稀释到终浓度为1 mg/mL。对于80 mm×80 mm的凝胶来说，每个泳道加5到10 μL的阳性对照。将配制好的阳性对照分装后-20℃保存。

6. 配制阴性对照（大豆胰蛋白酶抑制剂）：向1 mg固体中加入0.5 mL超纯水，使得溶液浓度为2 mg/mL。用SDS-PAGE上样缓冲液将溶液稀释到终浓度为1 mg/mL。对于80 mm×80 mm的凝胶来说，每个泳道加5到10 μL的阴性对照。将配制好的阴性对照分装后-20℃保存。

7. 样品稀释：用SDS-PAGE上样缓冲液将样品浓度稀释为1 mg/mL，对于80 mm×80 mm的凝胶来说，每个泳道加5到10 μL的样品。

凝胶染色的操作步骤（注意:请在通风橱中进行以下操作）

1. 取出电泳后的SDS-PAGE凝胶，加入到100 mL 50%甲醇溶液中，完全浸泡30分钟后，倒出甲醇溶液。

2. 用100 mL 3%乙酸溶液洗涤胶块两次，每次轻轻振荡10分钟。

（注：如有需要，此步的胶块可在超纯水中4℃过夜处理。）

3. 将胶块转移到25 mL氧化试剂中，轻轻振荡15分钟。

4. 用100 mL 3%乙酸溶液洗涤胶块3次，每次轻轻振荡5分钟。

5. 将胶块转移到25 mL糖蛋白染色试剂中，轻轻振荡15分钟。（注：若染色试剂中有晶体析出，只需离心取上清液去除晶体即可，不要加热来溶解晶体。）

6. 将胶块转移到25 mL还原试剂中，轻轻振荡5分钟。

7. 用3%乙酸溶液洗涤胶块，然后用超纯水洗涤至显色，糖蛋白将显现为品红条带。胶块保存在3%乙酸溶液中。

硝化纤维素膜染色的操作步骤（注意:请在通风橱中进行以下操作）

1. 用20 mL 3%乙酸溶液洗涤膜两次，每次轻轻振荡10分钟。

2. 将膜转移到10 mL的氧化试剂中，轻轻振荡15分钟。

3. 用10 mL 3%乙酸溶液洗涤膜3次，每次轻轻振荡5分钟。

4. 将膜转移到10 mL的糖蛋白染色试剂中，轻轻振荡15分钟。（注：若染色试剂中有晶体析出，只需离心取上清液去除晶体即可，不要加热来溶解晶体。）

5. 将膜转移到10 mL还原试剂中，轻轻振荡5分钟。

6. 用3%乙酸溶液洗涤膜，然后用超纯水洗涤至显色，糖蛋白将显现为品红条带。膜可保存在3%乙酸溶液中。