技术资料
Tth 聚合酶说明书
发布时间:2017/5/9 21:06:00产品特点:
本酶来源于嗜热菌Thermus thermophilus HB8。在有Mg2+等二价阳离子存在的情况下,具有DNA 多聚酶活性。它与Taq 酶一样被广泛用于PCR反应,但耐热性比Taq 酶高,因此对高GC 含量模板的PCR 也有较好的效果。本酶基本上没有3'→5'外切酶活性及5'→3'外切酶活性,所以也可用于双脱氧法测序。另外,本酶具有RTase 活性,在Mn2+存在的情况下,RTase活性会得到强化。利用该特性,可以用来在同一管中进行逆转录反应和PCR反应,即一步法RT PCR。(但是,在Mn2+存在时,RT-PCR 的准确性不高)此外,本酶与Taq DNA 多聚酶一样,PCR 产物可通过T 载体进行TA 克隆。
它具有下列特点:
1. RT-PCR 反应的特异性增加:在较高的温度下进行逆转录,增加了引物杂交和延伸的特异性。
2. 二级结构减少:在较高的温度下进行逆转录,减少了由于RNA 二级结构引起的问题。
低温运输,-20℃保存,有效期一年。
以λDNA 为模板,以10×Tth Buffer (+ MgCl2)作为缓冲液进行体积为50uL 的PCR 扩增反应为例
注意事项
1. 循环测序
该酶为耐热性酶,可通过与PCR 同样的温度条件进行测序反应。由于其高温稳定性好,对于复杂结构的模板效果较好。
2. 引物
用于耐热性酶测序的引物需比用于非耐酶测序的引物设定更长的时间。采用较短的引物时,可能会出现不能获得条带变淡的情况。