超快蛋白银染试剂盒说明书
发布时间:2017/5/9 21:39:00核酸银染的原理是银离子(Ag+)可与蛋白质等大分子有机物形成稳定的复合物,然后用还原剂如甲醛在碱性环境下使Ag+还原成银颗粒,可把蛋白电泳带染成黑褐色。它主要用于聚丙烯酰胺凝胶电泳染色,其灵敏度比考马斯亮蓝高100倍。但常规的银染方法由固定、氧化、染色、显影、终止等步骤组成,操作十分繁琐,尤其不适用于大批量实验。为解决此问题,本公司推出本产品,其特点如下:
1. 超快,整个过程只需要不到60分钟。
2. 操作简单,只有固定(30分钟)、染色(10分钟)和显影(10分钟)三步。
3. 灵敏度比考马斯亮蓝染色高100倍,能检测到10ng的蛋白质条带。
4. 三个成分中的两个都是现用现配,可重复性好。
常温运输及保存,有效期一年。
使用方法:
一:配制银染固定液 100 mL (对mini PAGE胶)
将40mL 无水乙醇、10mL 乙酸和50 mL去离子水充分混合即可使用。
二:配制溶液A
需要配制的溶液A(染色液)的体积完全跟PAGE胶的大小相关,一般的mini-PAGE胶需要20-30mL。下面的用量是针对配制100mL溶液A。如果配制的溶液A的体积不是100mL,则需按比例改变各成分用量。在一干净烧杯中加入下列成分搅拌混匀即可。溶液A需要新鲜配制。
二:配制溶液B
需要配制的溶液B(显色液)的体积完全跟PAGE胶的大小相关,一般的mini-PAGE胶需要20-30mL。下面的用量是针对配制100mL溶液B。如果配制的溶液B的体积不是100mL,则需按比例改变各成分用量。在一干净烧杯中加入下列成分搅拌混匀即可。溶液B需要新鲜配制。
三:银染
1. PAGE电泳或SDS-PAGE电泳结束后,将胶转移到装有100 mL银染固定液的瓷盘中,摇晃30分钟以去除干扰银染的成分(如甘氨酸、SDS、DTT、甘油等)。注:此步很重要,否则银染背景很高。
2. 用100 mL去离子水漂洗2次,每次2分钟。
3. 将PAGE胶转移到适当体积的溶液A中,使溶液A在轻柔摇晃过程中能够淹没PAGE胶。室温摇晃处理10分钟。
4. 倒掉溶液A,用100 mL去离子水快速漂洗2次,每次半分钟。
5. 将PAGE胶转移到适当体积的溶液B中,使溶液B在轻柔摇晃过程中能够淹没PAGE胶。室温摇晃直到蛋白电泳条带显现(一般需要10分钟左右)。
6. 迅速将PAGE胶置于适当背景下照相留存。胶的颜色肯能会逐渐加深,如果有必要保存胶,可以用自备的5%的乙酸终止显色。