DH5α感受态细胞

发布时间:2017/5/9 21:23:00

产品特点:

本产品是采用大肠杆菌DH5α菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于DNA

的热击转化。DH5α是一种常用于质粒克隆的菌株,其φ80lacZΔM15基因产物可与载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α 互补,可用于蓝白斑筛选。recA1 和endA1 的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。使用pUC19质粒检测,转化效率不低于107,适用于高效的质粒DNA克隆并能保证高拷贝质粒的稳定复制。

本菌种来源于Hoffman-Berling 1100菌种

干冰运输、-80℃保存,有效期半年。

使用方法:

1. 取感受态细胞置于冰浴中。转化感受态细胞的建议用量为50-100μl,可以根据

实际情况分装使用。

以下实验以50 μl感受态细胞为例。

2. 待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量

的DNA,通常100 μl 感受态细胞能够被1 ng 超螺旋质粒DNA所饱和),用移液器轻轻吹打混匀,冰浴30分钟。

3. 42℃热击90秒,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3分钟。

4. 每个离心管中加入800 μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃

摇床,200 rpm (小于225rpm)振荡培养45分钟使菌体复苏。

5. 根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含相应抗生素的SOC或LB固体

琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于37℃直至液体被吸收,

倒置培养,37℃培养12-16 小时。

注意:

1 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可取少量转化产物涂布平板;若转化的DNA总量较少,可取200-300 μl 转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少,可通过离心(4,000 rpm ,2分钟)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于平板中。

2 新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

3 涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。