无RNase的DNase溶液说明书

发布时间:2017/5/9 16:52:00

产品特点:

本产品是从牛胰DNase中精制的无RNase污染的DNase,专门用于降解RNA样品中的DNA污染,具有下列特点:

1. 高效,能使总RNA中的基因组DNA污染降低到电泳检测不到的水平。

2. 同时降解单链DNA和双链DNA。

3. 不含RNase,可以保证RNA分子完整性不受任何影响。

4. 反应条件经过优化,可以用于快速降解硅胶膜上吸附的DNA,也可以用于快速降解液体反应体系中的DNA。

5. 可以用于总RNA提取和体外转录中去除DNA。也可用于切口平移(Nick Translation)和DNase印迹法研究DNA-蛋白质相互作用。


低温运输,-20℃保存,有效期一年。


使用方法:

一、去除RNA样品中污染的基因组DNA(仅供参考,本试剂盒不含RNase-free DNase以外的所需试剂)

1. 在一无RNA酶的离心管中配制50 μl的反应液

2. 混匀,短暂离心,37℃放置30分钟;

3. 加入2 uL 50 mM EDTA溶液,65℃放置15分钟。此步可以灭活DNase。RNA在加热时容易水解,也可以使用酚/氯仿抽提去除DNase,然后再乙醇沉淀RNA。如果RNA在20ug以上,也可以使用本公司的RNAclean

试剂盒进行柱式纯化,回收 RNA。

4. 电泳检测是否去除了基因组 DNA,然后进行后续实验。

二、除去硅胶膜离心吸附柱上的 DNA(仅供参考,本试剂盒不含 RNase-free DNase 以外的所需试剂)

1. 在柱式法提取过程中,完成洗涤步骤。

2. 配制 50 uL DNase 工作液。

3. 加在离心吸附柱中间,室温放置5-30分钟。

4. 加入0.5 mL 自备洗柱液洗涤两次。

5. 用RNA洗脱液洗脱即得无DNA的RNA样品。

三、除去RNA体外转录反应中的DNA模板(仅供参考,本试剂盒不含RNase-free DNase以外的所需试剂)

1. 按2 U RNase-free DNase/ug DNA模板的比例在RNA体外转录反应中加入RNase-free DNase。注意:酶的用量也许需要优化。

2. 37℃放置15分钟。

3. 加入2 uL 50 mM EDTA溶液,65℃放置15分钟;此步可以灭活DNase。RNA在加热时容易水解,也可以使用酚/氯仿抽提去除DNase,然后再乙醇沉淀RNA。如果RNA在20 ug以上,也可以使用本公司的RNAclean试剂盒(需另购)进行柱式纯化,回收RNA。

四、用于切口平移法(Nick Translation)DNA探针标记(仅供参考,本试剂盒不含RNase-free DNase以外的所需试剂)

注:稀释 RNase-free DNase 的缓冲液为 1×DNA 聚合酶 I 缓冲液:50 mM

2. 15℃放置 15-60 分钟。

3. 加入 10 uL 50 mM EDTA 溶液。

4. 65℃放置 15 分钟灭活酶。

5. 所得探针可以纯化后使用,也可以直接使用。