中量蛋白胶回收试剂盒说明书

发布时间:2017/5/9 16:26:00

产品特点:

十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)不仅可用于检测蛋白质的相对分子质量,而且也是分离纯化蛋白质的重要工具之一,随着蛋白质技术的微量化,有必要从凝胶中回收蛋白质以用于制备抗体、免疫印迹、氨基酸组分分析或末端序列测定等。本产品就是专门为此用途开发的中量蛋白胶回收法,它具有下列特点:

1. 简单,不需要复杂而昂贵的仪器(如电洗脱仪)。

2. 适用于变性胶(SDS-PAGE)和非变性胶。

3. 每次可以处理1 g 的PAGE 胶(具体多少蛋白质取决于上样的浓度)。

4. 回收率一般在50-90%之间(跟蛋白质大小,洗脱时间相关)。

5. 跟后续的实验兼容,包括2-D 电泳、质谱测序等。

常温运输,4℃保存,有效期一年。

使用方法:

1. 按常规方法进行变性(SDS-PAGE)或非变性蛋白电泳。

2. 切取含目的蛋白的胶(尽可能地把多余的胶切除,否则会影响回收效率)。

注意:固定和染色后蛋白回收效果很差,所以建议把样品分多孔上样,电泳后只切其中一个样孔的胶条进行固定和染色,然后将此胶条放回到在整体胶中原来的位置,通过显色胶条上的蛋白条带找到在未染色胶上对应区域,并切下此区域的胶进行回收。

3. 将切下的、重量不超过1 克的胶块转移到30 mL 塑料注射器中。

4. 用塑料注射器推杆将胶块从端口挤压出去,使之变成细小的碎片,用自备的15mL 塑料离心管收集这些破碎的凝胶颗粒。

5. 加入1 mL 溶液A,4℃摇晃洗脱至少2-16 小时(过夜)。此时将将要使用的溶液B 放在冰箱预冷。

6. 10,000 g 离心10 分钟,转移上清到新的10-15mL 的塑料离心管中,注意不要吸取碎胶。

7. 加入5 倍体积的预冷的溶液B,摇晃混匀。

8. -20℃放置至少10-30 分钟。

9. 室温12,000 g(注意:一定要检查使用的离心管是否能够耐受次离心力,如果不能建议将溶液分到1.5 mL 的塑料离心管中再进行离心处理)离心5-20 分钟,弃上清。

10. 室温充分晾干,得到的沉淀即为回收的蛋白质。回收的蛋白质可溶解在适当的缓冲液中,可用于后续实验(2-D 电泳、质谱测序等)