柱式探针纯化试剂盒说明书

发布时间:2017/5/9 14:58:00

本产品是基于分子排阻层析原理的、专门用于纯化同位素和非同位素标记的核酸探针的试剂盒。在分子排阻层析过程中,大分子(标记的核酸探针或Oligo 探针)将绕过层析介质,快速穿透出层析柱,小分子(未参入的核苷酸)

将进入层析介质中,缓慢穿透出层析柱。


本产品具有下列特点:

1. 即开即用,提供纯化所需要的所有溶液和介质,不需要单独准备每种试剂,免去用户自己摸索条件。

2. 适用于PCR 标记、随机引物标记、切口平移和填入法标记。

3. 能去掉绝大部分的未标记物、盐离子等小分子。

4. 足够10 次纯化使用,每次可以纯化50 uL 的标记反应液。

5. 可用于DIG、生物素、Cy3、Cy5 等非同位素标记的DNA 和RNA 探针(由于标记分子带非极性基团,容易进入有机相,因此这些探针不能用传统的酚氯仿抽提-乙醇沉淀法纯化)。

常温运输及保存,有效期一年。

注意:由于非同位素标记的探针浓度一般都比较低,非常容易吸附到枪头或离心管的表面,造成探针的损失,因此使用硅化的离心管和枪头。

1. 摇晃Sephadex G50 介质至均匀,迅速转移0.5 mL 到离心柱中,套上套管(又叫收集管)。

2. 2000rpm 室温离心1 分钟,Sephadex G50 介质将压紧在柱子里面。

3. 倒掉套管中的穿透液,再加0.5mL 的摇晃后得到的Sephadex G50 介质,2000rpm 室温离心1 分钟。

4. 经上述步骤会得到体积约为0.5mL 压紧后的Sephadex G50 介质。如不足,再加入少量的G50 介质离心,直到体积达到0.5 mL 左右。倒掉套管中的穿透液。

5. 在柱子中Sephadex G50 界面的上面加入50 uL TE 缓冲液,套上套管,2000rpm 室温离心1 分钟,测量收集管中穿透液的体积。

6. 重复上步3-5 次,直到收集管中穿透液的体积跟加入的体积一样(50uL)。

7. 将50 uL 的标记探针(必须使用50 uL 样品。如果没有50 uL,需要用TE 缓冲液或水补足到50 uL)加到柱子中Sephadex G50 界面的上面,套上一个自备的(是硅化的)离心管。

8. 2000rpm 室温离心1 分钟,离心管中的穿透液将含标记探针,未参入的标记物将滞留在介质中。

9. 电泳或点杂交检测探针回收效率后直接使用或放-20℃长期保存。