液体样品蛋白纯化回收试剂盒说明书

发布时间:2017/5/9 10:18:00

产品特点:

本产品专门用于对液体样品进行蛋白提取浓缩、脱盐、脱去垢剂、脱还原剂等。

本产品具有下列特点:

1. 适用于各种液体样品,包括蛋白溶液、胞浆提取液、胞核提取液、细胞或微生物培养基上清液、血液、尿液、脑脊液等。也适于原代或传代细胞悬液。

2. 灵敏,对一般蛋白样品,浓度可达1ug/mL;对含SDS 的样品,浓度为5 ug/mL。

3. 蛋白回收率95-100%,远高于经典的丙酮或三氯醋酸沉淀法,且可有效去除样品中的脂质,不影响后续SDS-PAGE 和Western Blot 等生物实验

4. 得到的蛋白质可用于后续的SDS-PAGE、免疫沉淀和质谱分析等实验。但蛋白已经变性,没有活性。

5. 能有效去除液体样品中的盐(1M)、还原剂(1%巯基乙醇或DTT)、去垢剂(5%SDS、1% Triton X-100、1% NP-40)和油脂等。

6. 操作方便迅速,只需要混匀后离心,不需要其他仪器。

7. 产品稳定,可室温长期放置。

常温运输和保存,有效期一年。

使用方法:

使用方法一(用于不含SDS 的液体样品,但样品蛋白浓度不能低于1 ug/mL)

1、将100 μL 需要液体蛋白样品转移到一个自备的1.5 mL 塑料离心管中。

2、加入10 μL 溶液A,涡旋激烈震荡10-30 秒混匀。

3、冰上放置15 分钟。

4、加入10 μL 溶液B,轻轻混匀。

5、冰上放置60 分钟。

6、4℃12000-15000×g 离心10 分钟。

7、小心移弃上清液,保留蛋白沉淀。

8、加入1 mL 冰浴的溶液C,震荡混匀后4℃12000-15000×g 离心15 分钟。

9、小心移弃上清液,保留蛋白沉淀。

10、短暂离心,小心移弃残留上清液后,将有蛋白沉淀的离心管敞开放置在冰上,空气晾干。一般需要10 分钟左右。

11、样品放4℃保存或立即电泳检测。可直接用1×SDS-PAGE 上样液或其他电泳缓冲液溶解蛋白沉淀,取适量上样。如果蓝色的溴酚蓝染料变黄,则说明有残留酸性物质污染,必须加少量自备的1M Tris-HCl(pH8.8)缓冲液,直到颜色变成蓝色为止,否则将影响电泳结果。

使用方法二(用于含SDS 的液体蛋白样品,但样品蛋白浓度不能低于5 ug/mL)

1、将200 μL 液体蛋白样品转移到一个自备的1.5 mL 塑料离心管中。

2、加入8 μL 溶液B,涡旋激烈震荡10-30 秒混匀。

3、冰上放置30 分钟或-20℃放置15 分钟(过夜放置更好)。

4、4℃ 12000-15000×g 离心15 分钟。

5、小心移弃上清液,保留蛋白沉淀。

6、加入1 mL 冰浴的溶液C,震荡混匀后4℃ 12000-15000×g 离心15 分钟。

7、小心移弃上清液,保留蛋白沉淀。

8、短暂离心,小心移弃残留上清液后,将有蛋白沉淀的离心管敞开放置在冰上,空气晾干。一般需要10 分钟左右。

9、样品放4℃保存或立即电泳检测。可直接用1×SDS-PAGE 上样液或其他电泳缓冲液溶解蛋白沉淀,取适量上样。如果蓝色的溴酚蓝染料变黄,则说明有残留酸性物质污染,必须加少量自备的1M Tris-HCl(pH8.8)缓冲液,直到颜色变成蓝色为止,否则将影响电泳结果。