细胞膜/胞浆/核膜蛋白分步提取试剂盒

规格 50T 100T

试剂A：提取液A 20ml 40ml

试剂B：核提取液B 10ml 20ml

试剂C：提取液C 250ul 500ul

试剂D：提取液D 10ml 20ml

试剂E：蛋白酶抑制剂混合物 250ul 500ul

试剂F：磷酸酶抑制剂混合物 250ul 500ul

组份G：针头 1 1

组份H：针筒 1 1

注：

● 蛋白酶抑制剂混合物：包含7种独立的蛋白酶抑制剂，AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin

A、Bestatin、E-64、EDTA。

注意：

1、 蛋白酶抑制剂混合物避免反复冻融。

2、 如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以全部加入提取液。

储存条件：

蛋白酶抑制剂-20℃保存；

磷酸酶抑制剂2-8℃保存；

蛋白提取液2-8℃保存。

有效期：

一年。

注意事项：

● 本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。

● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管

底，避免开盖时试剂损失。

● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。

● 使用性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清

洗并彻底清除残留清洁剂。

● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。

产品简介：

????细胞膜蛋白/胞浆蛋白/核膜蛋白提取试剂盒适用于从各种原代或传代细胞和各

种实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、

结缔组织等哺乳动物组织中分步提取细胞膜蛋白/胞浆蛋白/细胞核膜蛋白/核内蛋白。提取

过程简单方便，可在2 小时内完成。该试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对

蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。本试剂盒含有的独特配方能够溶解细胞膜包

括细胞质膜和核膜。提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫共沉淀等下

游蛋白研究。

产品特点：

1、 使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。

2、 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。

3、 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。

4、 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包

含7 种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。

该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白

酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

试剂盒以外自备试剂和仪器

● 移液器、吸头 ● 离心机及离心管

● 涡旋振荡器 ● 冰箱，冰盒

使用方法：

使用注意事项：

1. 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

2. 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

3. 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。

4. 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

蛋白提取步骤：

1. 提取液制备：每400ul 冷的蛋白提取液A/D 中加入分别加入2ul 蛋白酶抑制剂

混合物和2ul 磷酸酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。

2. 取5-10×106 个细胞①，在4℃，1000rpm 条件下离心5-10 分钟，小心吸取培养

基，尽可能吸干，用细胞刮刀收集细胞。（组织样本50-100mg 剪碎，加冷PBS，用组

织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体（或用液氮研磨），冰上静置5 分钟，小心将匀浆吸入

另一预冷的干净离心管。在4℃，500g 条件下离心2-3 分钟，弃上清。）

3. 用冷PBS 洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。

4. 每5×106 个细胞中加入400ul 冷的蛋白提取液A，混匀后，在4℃条件下用试

剂盒所配针筒反复吸吹细胞，使细胞完全破裂。

5. 在4℃，1000g 条件下离心5 分钟。

6. 快速将上清（I）吸入另一预冷的干净离心管，在沉淀中加入200μl 冷的提取液

B，高速涡旋振荡15 秒。

7. 将混匀的提取液B 置2-8℃振荡1-2 小时，至沉淀充分裂解，沉淀明显减少。

8. 37℃水浴10 分钟，37℃下②1000g-2000g 力离心5 分钟，此时溶液分为两层

（对着光线看），上层为核内蛋白，下层是核膜蛋白约为20-40μl。小心移除上

层，用1-2 倍体积的提取液D 溶解下层即为细胞核膜蛋白。

9. 在步骤6 中所得到的上清（I）中加入5ul 提取液C，充分混匀。37℃水浴10

分钟。

10. 37℃下② 1000g 离心3 分钟，此时溶液分为两层（对着光线看），上层是胞浆

蛋白部分，下层是细胞膜蛋白部分约为40-50μl。

11. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到胞浆蛋白。

12. 用80-200μl 冰冷的提取液D 溶解步骤10 中的下层部分，即得细胞膜蛋白。

13. 将上述蛋白提取物定量③后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验④。

注：

① 细胞数量根据实验情况调整，每次的裂解液用量并不是一定的，请根据实际情况调整。

② 必需保证在37℃左右下离心，至少确保30℃以上。无可控温的离心机时，用常温的离心

机在室温离心即可，适当缩短离心时间至2-3 分钟。

③ 建议用BCA 法进行蛋白定量。

④ 蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。