规格 50T 100T

总蛋白提取液 25ml 50ml

蛋白酶抑制剂混合物 100ul 200ul

磷酸酶抑制剂混合物 100ul 200ul

注：

● 总蛋白提取液： 含多种有效成分，可以充分释放胞浆蛋白、核蛋白和膜蛋白，又可结合释出的蛋

白防止沉淀。

● 蛋白酶抑制剂混合物：包含6种独立的蛋白酶抑制剂，AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin

A、Bestatin、E-64。

注意：

1、蛋白酶抑制剂混合物避免反复冻融。

2、如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以全部加入提取液。

储存条件：

蛋白酶抑制剂-20℃保存；磷酸酶抑制剂2-8℃保存；蛋白提取液室温保存。

有效期：

一年。

注意事项：

● 本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。

● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管

底，避免开盖时试剂损失。

● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。

● 使用性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清

洗并彻底清除残留清洁剂。

● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。

产品简介：

????总蛋白提取试剂盒适用于从各种原代或传代细胞和各种实体组织，如脑、脊髓、

神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等哺乳动物组织

中提取总蛋白。提取过程简单方便，可在1 小时内完成。该试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合

物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。本试剂盒含有的独特配

方能够溶解细胞膜包括细胞质膜和核膜。提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电

泳、免疫共沉淀等下游蛋白研究。

本试剂盒中不有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。

本试剂盒提取的蛋白不可用于 2D 电泳。如下游实验需要用于2D 电泳，请使用货号????????????

的试剂盒。

应用示例：

产品特点：

1、使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。

2、将蛋白提取的时间缩短至 30 分钟-1 小时。

3、含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。

4、紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。

5、蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包

含6 种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。

该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白

酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

试剂盒以外自备试剂和仪器

● 移液器、吸头 ● 离心机及离心管

● 涡旋振荡器 ● 冰箱，冰盒

使用方法：

使用注意事项：

?? 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

?? 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

?? 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。

?? 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

?? Western 实验内参可以选用beta-actin、GAPDH、Tubulin。

?? 更多蛋白提取常见问题分析等资料可以联系本公司索取。

细胞总蛋白提取：

悬浮细胞蛋白提取：

1. 提取液制备：每500ul 冷的总蛋白提取液中加入2ul 蛋白酶抑制剂混合物和2ul

磷酸酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。

2. 取 5×106 个细胞①，在4℃，2500g 条件下离心5 分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。

3. 用冷 PBS 洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。

4. 每 5×106 -1×107 个细胞（大约50mg 细胞，50ul 细胞压积）中加入500ul 冷的

总蛋白提取液，吹打混匀后，在4℃条件下振荡20 分钟，至细胞充分裂解，无

明显细胞沉淀。

5. 在 4℃，14000g 条件下离心15 分钟。

6. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到总蛋白。

7. 将上述蛋白提取物定量②后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验③。

注：

① 细胞数量根据实验情况调整，每次的裂解液用量并不是一定的，请根据实际情况调整。

② 建议用 BCA 法进行蛋白定量。

③ 蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

贴壁细胞蛋白提取：

1、提取液制备：每500ul 冷的总蛋白提取液中加入2ul 蛋白酶抑制剂混合物和2ul

磷酸酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。

2、小心吸取贴壁细胞的培养液。

3、用冷 PBS 洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干PBS。

4、加入适量①冷的总蛋白提取液，振荡5-10 分钟，至细胞充分裂解，用细胞刮刮

一遍，将裂解液吸入另一干净离心管。

5、在 4℃，14000g 条件下离心15 分钟。

6、将上清吸入另一预冷的干净离心管，即得到总蛋白。

7、将上述蛋白提取物定量②后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验③。

注：

① 推荐裂解液使用量：100mm 培养皿500ul；60mm 培养皿250ul；6 孔板200ul/孔；24 孔

板100ul/孔；96 孔板50ul/孔；75cm2 培养瓶500ul。

② 建议用 BCA 法进行蛋白定量。

③ 蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

组织总蛋白提取：

1. 提取液制备：每500ul 冷的总蛋白提取液中加入2ul 蛋白酶抑制剂混合物和2ul

磷酸酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。

2. 取 50-100mg 组织样本剪碎①，加入总蛋白提取液，用组织匀浆器匀浆至无明显

肉眼可见固体②。

3. 将组织匀浆吸入一预冷的干净离心管中，在4℃，10000-14000g 条件下离心15

分钟。

4. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即得到总蛋白。

5. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

注：

① 如果组织样品很细小，可以剪碎后直接加入提取液振荡 15 分钟，可以不用匀浆器。

② 用液氮研磨的方法更佳