植物磷酸化蛋白提取试剂盒说明书

发布时间:2017/5/12 9:25:00

注:

● 蛋白提取液: 含多种有效成分,可以充分释放蛋白,又可结合释出的蛋白防止沉淀。提取液中已

含磷酸酶抑制剂混合物。

● 蛋白酶抑制剂混合物:包含7种独立的蛋白酶抑制剂,AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin

A、Bestatin、E-64、EDTA。

注意:

1、 蛋白酶抑制剂混合物避免反复冻融。

2、 如果试剂盒不能短时间内用完,蛋白酶抑制剂混合物不可以全部加入提取液。

储存条件:

蛋白提取液室温保存;

磷酸酶抑制剂2-8℃保存;

蛋白酶抑制剂-20℃保存。

有效期:

一年。

注意事项:

● 本试剂盒仅供科学研究使用,不可用于诊断或治疗。

● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖和管内壁上的液体离心至管底,避免开盖时试剂损失。

● 禁止与其他品牌的试剂混用,否则会影响使用效果。

● 使用性吸头、管、瓶或玻璃器皿,可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。

● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。

● 不论是植物细胞或组织样本,应充分保证蛋白样本的新鲜。组织离体后应当立即放到液氮中保存,长期保存的话也在液氮中(如果无液氮条件则放置-80℃)。

● 避免蛋白的反复冻融。

● 电泳buffer 中也可加入Na3VO4。

● 本提取配方中含有蛋白激酶及磷酸酶这两种酶的抑制剂混合物,因此不能用于蛋白激酶和磷酸酶这两种酶的免疫共沉淀实验。

产品简介:

蛋白质磷酸化是细胞信号传递系统的组成部分,在许多生命活动中扮演重要角色,如基因与代谢活动的调节,细胞分化,肿瘤形成,细胞周期现象,由生长因子和激素激发的信号传递等。在植物中,已知蛋白磷酸化与光刺激,植物生长激素和热刺激有关。近来的研究结果表明,蛋白磷酸化和蛋白激酶参与植物保卫反应的启动。植物病原菌产生的植物毒素,致病过程和蛋白酶抑制因子等均可诱发植物蛋白质的磷酸化反应。

????植物磷酸化蛋白提取试剂盒适用于从各种植物细胞和实体组织中提取磷酸化蛋白。提取过程简单方便,可在1 小时内完成。该试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物,阻止了蛋白酶对蛋白的降解,为提取高纯度的蛋白提供了保证。本试剂盒含有的独特配方能充分保护磷酸化蛋白的磷酸化,够溶解细胞膜包括细胞质膜和核膜。提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫共沉淀等下游蛋白研究。

产品特点:

1、 使用方便,从细胞,组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。

2、 将蛋白提取的时间缩短至30 分钟-1 小时。

3、 含蛋白稳定剂,提取的蛋白稳定。

4、 紫外检测蛋白浓度时,背景干扰低。

5、 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含7 种独立的蛋白酶抑制剂;每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。

该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性,包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

试剂盒以外自备试剂和仪器

● 移液器、吸头 ● 离心机及离心管

● 涡旋振荡器 ● 冰箱,冰盒

使用方法:

使用注意事项:

? 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。

? 实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

? 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀,不影响使用,溶解后正常使用。

? 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

植物组织样本:

1、 提取液准备:每500ul 冷的提取液中加入2ul 磷酸酶抑制剂和2ul 蛋白酶抑制剂,混匀后置冰上备用。

2、 取洗净擦干后并去除叶梗和粗脉的200mg 鲜嫩植物组织样本剪碎,采用以下一种方法处理:

i. 加入500ul 提取液A 后用匀浆机/匀浆器匀浆。

ii. 置于研钵中用液氮研磨,研磨后加入500μl 冷的提取液 A。

iii. 加入500ul 提取液A 直接置冰上研磨。

3、 研磨后吸入一个预冷的干净离心管中在冰上或4℃冰箱静置1 小时。

4、 在4℃,12000rpm 以上条件下离心10-15 分钟。

5、 将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到植物磷酸化蛋白。

上述蛋白提取物请分装后于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

细胞样本:

1、 提取液准备:每500ul 冷的提取液中加入2ul 磷酸酶抑制剂和2ul 蛋白酶抑制剂,混匀后置冰上备用。

2、 细胞用PBS 洗涤2 次。

3、 加入细胞体积5-10 倍体积的蛋白提取液,振荡1 小时。

4、 在4℃,12000rpm 以上条件下离心10-15 分钟。

5、 将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到植物磷酸化蛋白。

上述蛋白提取物请分装后于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

冻存样本:

1、 冻存组织样本参照上述组织样本步骤操作。

2、 冻存细胞样本中直接加入5-10 倍体积的蛋白提取液,振荡30 分钟。

3、 在4℃,12000rpm 以上条件下离心15 分钟。

4、 将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到植物磷酸化蛋白。

上述蛋白提取物请分装后于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。