储存条件：

蛋白酶抑制剂-20℃保存；

提取液2-8℃保存；

膜蛋白溶解液室温保存。

有效期：

一年。

注意事项：

● 本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。

● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。

● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。

● 使用性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。

● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。

产品简介：

线粒体(mitochondria)是真核细胞中产生能量的重要细胞器，细胞中的能源物质—脂肪、糖、部分氨基酸在此进行最终的氧化，并通过偶联磷酸化生成ATP，供给细胞生理活动之需。

跨膜蛋白承担各种生物功能，在生物的各种发展过程中扮演重要角色。膜蛋白样品的制备需要充分考虑到与下游的胶分析及质谱分析等应用配套，因此膜蛋白样本制备成为一个难以逾越的挑战。

????植物线粒体膜蛋白提取试剂盒用简便快速的方法可以从各种植物样本中提取线粒体膜蛋白，提取过程简单方便，可在一小时内提取得到高质量的线粒体膜蛋白。该试剂盒含有蛋白酶抑制剂混合物和磷酸酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高质量的蛋白提供了保证。该试剂盒提取的膜蛋白具有天然活性，提取的蛋白可用于WesternBlotting、免疫共沉淀、酶活性测定等各种下游蛋白研究实验。

产品特点：

1、使用方便。

2、将蛋白提取的时间缩短至 1 小时。

3、含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。

4、紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。

5、蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6 种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。

该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性。

试剂盒以外自备试剂和仪器

● 移液器、吸头 ● 离心机及离心管

● 涡旋振荡器 ● 冰箱，冰盒

使用方法：

使用注意事项：

?? 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

?? 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

1、取新鲜植物样本叶片，洗净擦干后去除叶梗和粗脉。

2、取洗净擦干后并去除叶梗和粗脉的 2g 植物组织样本剪碎，采用以下一种方法

处理：

I、加入 3ml 提取液A 后用匀浆机/匀浆器匀浆。

II、置于研钵中用液氮研磨，研磨后加入 3ml 冷的提取液A 。

III、加入 3ml 提取液A 直接置冰上研磨。

3、将匀浆用 250 目细胞筛或3 层纱布或脱脂棉过滤。或者在4℃，100×g 力条件

下离心1 分钟，收集上清，弃沉淀。

4、将滤液 700g 离心10 分钟。取上清。

5、将上清 11000-12000g 离心20 分钟。

6、弃上清，在沉淀中加入500ul 提取液B 和2ul 蛋白酶抑制剂混合物，充分混匀后在冰上静置1-2 小时，中间每隔15-20 分钟高速涡旋振荡15 秒。

7、在 4℃，12000×g 条件下离心5 分钟，取上清。

8、在上清中加入 5ul 提取液C，充分混匀。

9、在 37℃水浴10 分钟。

10、在 37℃ 800-1000g 离心2 分钟。

11、此时溶液分为两层，小心移除上层，保留下层溶液，大约 50ul。

12、用 50-150μl 膜蛋白溶解液稀释下层溶液，即得线粒体膜蛋白。

13、将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或调整相应的浓度后直接用于下游实验。