血液样品和各种临床样品（包括组织检查、FFPE切片或少量细胞样品）都是基因表达分析和诊断的常见材料，但这些样品通常数量有限，质量不高，并且还没法进行第二次取样。所以得到足够RNA量供后续试验是一个非常棘手的瓶颈。为解决这一问题，本公司根据Ribo-SPIA技术，开发了本产品。Ribo-SPIA技术的是利用DNA/RNA嵌合引物，以带polyA尾巴的mRNA为模板进行逆转录并得到双链cDNA、RNase H不间断地在cDNA第1链中的RNA部分产生裂口，DNA聚合酶以此裂口为基础进行链取代聚合反应，产生cDNA单链。

本产品具有下列特点：

1. 高效，能线性扩增1000-10000倍，能用5-100 ng总RNA模板扩增得到5 ug左右的单链cDNA（扩增的cDNA主要来源于总RNA中的mRNA）。

2. 步骤简单方便，扩增在恒温进行，只需要4个小时，不需要特殊仪器设备。

3. 保真性好，保持RNA样品中各分子的相对丰度。

4. 尤其适用于RNA产量和质量都不高的样品。

5. 扩增得到的单链cDNA能直接用于各种后续试验，包括qPCR、芯片分析、杂交反应等。

6. 本产品足够做10次双链cDNA的合成，20次SPIA扩增。

低温运输，-20℃保存，有效期为1年。

使用方法：

一：样品RNA的制备

本产品不含RNA相关试剂，用于Ribo-SPIA扩增的每个批次的RNA样品先做一个预实验。总RNA样品的浓度必须在1-20ng/uL，RIBO-SPIA所需总RNA的量为1ug。也可以使用mRNA，Ribo-SPIA所需总mRNA的量为5-100 ng。过低则需要浓缩，过高则需要用无RNase的水稀释。RNA必须经过DNase处理，不能含DNA污染。微量提取时不能使用核酸类的助沉剂。注意：本产品只能扩增含带polyA尾巴的RNA，不能扩增DNA和不含polyA尾巴的RNA。

二：一管式双链cDNA的合成

1. 在0.5mL PCR管中，按下表配制双链cDNA合成反应。注意：每次实验设置一个阴性对照组，在此对照中用超纯水替代自备的mRNA或总RNA

三：SPIA扩增

2. 在0.5mL PCR管中，按下表配制20uL的SPIA反应体系。注意：设置两个阴性对照组，在此两个对照中分别用超纯水替代SPIA引物和cDNA双链反应液。

四：SPIA扩增产物的检测

3. 取5uL SPIA扩增产物进行PAGE电泳检测。标准的反应结果是产生长度在200-2000bp之间的产物。

4. 如果产物将用于PCR定量，则可以不经过纯化直接使用，如果需要用于芯片杂交和浓度测定，则需要按常规的方法纯化cDNA以便去除残留的dNTP和引物。

5. OD检测纯度和浓度。在OD260的波长下测样品你给的光吸收。由于扩增产物是单链DNA，故1OD260=33ug/mL。

6. 所得DNA可以放-20℃长期放置。